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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞复苏不成功，出现了一些问题。
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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细胞复苏不成功，出现了一些问题。已有10人参与

大家好，我们实验室的细胞最近出了些问题，每次复苏后都长得不好，形态改变而且不太增殖，最后在显微镜下观察，贴壁细胞很少，我们养的是PIEC细胞，以前都是消化后12小时就能长满，现在复苏后两天，丰度30%左右，我们实验都很注意，培养基.血清都换了，观察瓶内也没有污染，我想请教一下这是怎么回事？谢谢
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1楼2010-10-28 14:57:39
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liyangmiscap

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是冻存的细胞出了问题？
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愿与你携手，沿河看柳
2楼2010-10-28 15:12:48
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apple1057

新虫 (初入文坛)
谢谢你的回复，我们之前冻存的时候，冻存盒没有复温，会不会有很大影响？但是之前复苏的一次成功了，这次复苏观察，视野中有贴壁的，也有很多圆形细胞，而且有些细胞形态不好，呈长条状，甚至有些细胞发生了裂解。
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3楼2010-10-28 15:34:26
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-28 16:14:23
看你的描述，应该不存在污染的问题，细胞本身也没问题。
血清和培养液也问题。
那么，
可能是冻存的时候出问题了，可能是冻存液的问题，也可能是冻存程序的问题，也可能是手法的问题；
也有可能是你们跟换了培养液，细胞对不同厂家甚至不同批次的培养液都会有反应的
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2010-10-28 15:46:31
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apple1057

新虫 (初入文坛)
谢谢，刚才看了看以前冻存的细胞培养液中，FBS含量达到了20%，而我们复苏时才用到10%的FBS，我想请问是不是这个原因？
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5楼2010-11-11 14:21:50
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zhrei98

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
6楼2010-11-11 17:10:05
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by apple1057 at 2010-11-11 14:21:50:
谢谢，刚才看了看以前冻存的细胞培养液中，FBS含量达到了20%，而我们复苏时才用到10%的FBS，我想请问是不是这个原因？

培养过程中大多是10%的FBS，既可以让细胞长势良好又节省了不必要的成本；冻存时使用20%的FBS，是前辈们的一个经验良方，即冻存液比例为1：2：7。在操作中，也会有不同的改变。
你的问题或许真的就出在细胞冻存上：冻存液或者冻存程序。其结果是细胞膜已经遭到破坏而大多死亡，复苏当然不能如愿了。
虽然丰度较小，但也许还可以筛选出状态较好的细胞来吧，祝你好运！
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7楼2010-11-11 20:17:31
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apple1057

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhrei98 at 2010-11-11 17:10:05:
复苏时pH值要适当低些，如7.2左右可能有用

谢谢，那么如何调节pH呢？
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8楼2010-11-12 10:36:43
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apple1057

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-11 20:17:31:


培养过程中大多是10%的FBS，既可以让细胞长势良好又节省了不必要的成本；冻存时使用20%的FBS，是前辈们的一个经验良方，即冻存液比例为1：2：7。在操作中，也会有不同的改变。
你的问题或许真的就出在细胞冻 ...

谢谢你的建议，我想真的是我们冻存没有程序性降温的原因。那么如果复苏时要用多少浓度的FBS呢？
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9楼2010-11-12 10:39:08
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jAnmee

银虫 (正式写手)
解冻很关键，要快。。。
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国荣，家驹，MJ，为什么我喜欢的恩都死了。。。。
10楼2010-11-13 06:28:04
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