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汕头大学海洋科学接受调剂
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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细胞复苏不成功,出现了一些问题。 已有10人参与

大家好,我们实验室的细胞最近出了些问题,每次复苏后都长得不好,形态改变而且不太增殖,最后在显微镜下观察,贴壁细胞很少,我们养的是PIEC细胞,以前都是消化后12小时就能长满,现在复苏后两天,丰度30%左右,我们实验都很注意,培养基.血清都换了,观察瓶内也没有污染,我想请教一下这是怎么回事?谢谢
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hzxizh

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by apple1057 at 2010-11-11 14:21:50:
谢谢,刚才看了看以前冻存的细胞培养液中,FBS含量达到了20%,而我们复苏时才用到10%的FBS,我想请问是不是这个原因?

培养过程中大多是10%的FBS,既可以让细胞长势良好又节省了不必要的成本;冻存时使用20%的FBS,是前辈们的一个经验良方,即冻存液比例为1:2:7。在操作中,也会有不同的改变。
你的问题或许真的就出在细胞冻存上:冻存液或者冻存程序。其结果是细胞膜已经遭到破坏而大多死亡,复苏当然不能如愿了。
虽然丰度较小,但也许还可以筛选出状态较好的细胞来吧,祝你好运!
7楼2010-11-11 20:17:31
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liyangmiscap

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是冻存的细胞出了问题?
愿与你携手,沿河看柳
2楼2010-10-28 15:12:48
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apple1057

新虫 (初入文坛)

谢谢你的回复,我们之前冻存的时候,冻存盒没有复温,会不会有很大影响?但是之前复苏的一次成功了,这次复苏观察,视野中有贴壁的,也有很多圆形细胞,而且有些细胞形态不好,呈长条状,甚至有些细胞发生了裂解。
3楼2010-10-28 15:34:26
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-28 16:14:23
看你的描述,应该不存在污染的问题,细胞本身也没问题。
血清和培养液也问题。
那么,
可能是冻存的时候出问题了,可能是冻存液的问题,也可能是冻存程序的问题,也可能是手法的问题;
也有可能是你们跟换了培养液,细胞对不同厂家甚至不同批次的培养液都会有反应的
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
4楼2010-10-28 15:46:31
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