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apple1057

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】细胞复苏不成功，出现了一些问题。已有10人参与

大家好，我们实验室的细胞最近出了些问题，每次复苏后都长得不好，形态改变而且不太增殖，最后在显微镜下观察，贴壁细胞很少，我们养的是PIEC细胞，以前都是消化后12小时就能长满，现在复苏后两天，丰度30%左右，我们实验都很注意，培养基.血清都换了，观察瓶内也没有污染，我想请教一下这是怎么回事？谢谢

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1楼2010-10-28 14:57:39

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hzxizh

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引用回帖:

Originally posted by apple1057 at 2010-11-11 14:21:50:
谢谢，刚才看了看以前冻存的细胞培养液中，FBS含量达到了20%，而我们复苏时才用到10%的FBS，我想请问是不是这个原因？

培养过程中大多是10%的FBS，既可以让细胞长势良好又节省了不必要的成本；冻存时使用20%的FBS，是前辈们的一个经验良方，即冻存液比例为1：2：7。在操作中，也会有不同的改变。
你的问题或许真的就出在细胞冻存上：冻存液或者冻存程序。其结果是细胞膜已经遭到破坏而大多死亡，复苏当然不能如愿了。
虽然丰度较小，但也许还可以筛选出状态较好的细胞来吧，祝你好运！