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apple1057

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细胞复苏不成功,出现了一些问题。已有10人参与

大家好,我们实验室的细胞最近出了些问题,每次复苏后都长得不好,形态改变而且不太增殖,最后在显微镜下观察,贴壁细胞很少,我们养的是PIEC细胞,以前都是消化后12小时就能长满,现在复苏后两天,丰度30%左右,我们实验都很注意,培养基.血清都换了,观察瓶内也没有污染,我想请教一下这是怎么回事?谢谢
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apple1057

新虫 (初入文坛)

谢谢你的回复,我们之前冻存的时候,冻存盒没有复温,会不会有很大影响?但是之前复苏的一次成功了,这次复苏观察,视野中有贴壁的,也有很多圆形细胞,而且有些细胞形态不好,呈长条状,甚至有些细胞发生了裂解。
3楼2010-10-28 15:34:26
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apple1057

新虫 (初入文坛)

谢谢,刚才看了看以前冻存的细胞培养液中,FBS含量达到了20%,而我们复苏时才用到10%的FBS,我想请问是不是这个原因?
5楼2010-11-11 14:21:50
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apple1057

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zhrei98 at 2010-11-11 17:10:05:
复苏时pH值要适当低些,如7.2左右可能有用

谢谢,那么如何调节pH呢?
8楼2010-11-12 10:36:43
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apple1057

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by hzxizh at 2010-11-11 20:17:31:


培养过程中大多是10%的FBS,既可以让细胞长势良好又节省了不必要的成本;冻存时使用20%的FBS,是前辈们的一个经验良方,即冻存液比例为1:2:7。在操作中,也会有不同的改变。
你的问题或许真的就出在细胞冻 ...

谢谢你的建议,我想真的是我们冻存没有程序性降温的原因。那么如果复苏时要用多少浓度的FBS呢?
9楼2010-11-12 10:39:08
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