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cheaiyang

银虫 (初入文坛)

是不是冻存的时候吹打的太厉害了,对细胞有伤害
11楼2014-09-03 14:37:40
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 思行1993 at 2014-09-03 00:28:49
复苏方法是怎样的?你是冻存液直接补液培养第二天换液,还是离心再培养,一般我选择前者,效果还不错啊,你复苏的时候是在冰点时间留长了?

速溶——加1ml培养基——离心——重悬——培养,都是从液氮罐拿出来就拿到37度水浴速溶。复苏应该是没有问题,就是在冻存的时候,不知道除了什么问题,我拿别人的细胞来复苏就挺好的!
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
12楼2014-09-04 12:43:00
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cheaiyang at 2014-09-03 14:37:40
是不是冻存的时候吹打的太厉害了,对细胞有伤害

但是,同样的细胞我拿别人的细胞来复苏的时候,活细胞也很多的,就是我自己冻的就不行了!
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
13楼2014-09-04 12:43:58
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ghjzero

木虫 (正式写手)

有可能是细胞本身状态的问题~~~
Just do it!
14楼2014-09-04 15:41:02
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by ghjzero at 2014-09-04 15:41:02
有可能是细胞本身状态的问题~~~

可能吧。细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋啊!
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
15楼2014-09-04 16:51:37
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xipha

木虫 (正式写手)

我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的时候有离心么? 有的细胞要离心转速很低, 不然会挂.
16楼2014-09-06 03:13:39
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 03:13:39
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的 ...

离的,1000rpm,for 5 minutes at 25 度
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
17楼2014-09-07 14:16:20
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xipha

木虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-07 14:16:20
离的,1000rpm,for 5 minutes at 25 度...

能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的.
18楼2014-09-09 08:24:47
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Luse_91

新虫 (著名写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 08:24:47
能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的....

细胞的培养条件不是37度吗?这样是不是过渡得太多呀!
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
19楼2014-09-09 13:59:37
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xipha

木虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-09 13:59:37
细胞的培养条件不是37度吗?这样是不是过渡得太多呀!...

不是的, 我说的是复苏的时候. 你从液氮拿出来,化了在4度离心取上清,然后重悬起来. 再培养.
20楼2014-09-10 08:40:14
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