应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 3101  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cheaiyang

银虫 (初入文坛)
是不是冻存的时候吹打的太厉害了，对细胞有伤害
赞一下 回复此楼
11楼2014-09-03 14:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luse_91

新虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 思行1993 at 2014-09-03 00:28:49
复苏方法是怎样的？你是冻存液直接补液培养第二天换液，还是离心再培养，一般我选择前者，效果还不错啊，你复苏的时候是在冰点时间留长了？

速溶——加1ml培养基——离心——重悬——培养，都是从液氮罐拿出来就拿到37度水浴速溶。复苏应该是没有问题，就是在冻存的时候，不知道除了什么问题，我拿别人的细胞来复苏就挺好的！
赞一下 回复此楼
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
12楼2014-09-04 12:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luse_91

新虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by cheaiyang at 2014-09-03 14:37:40
是不是冻存的时候吹打的太厉害了，对细胞有伤害

但是，同样的细胞我拿别人的细胞来复苏的时候，活细胞也很多的，就是我自己冻的就不行了！
赞一下 回复此楼
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
13楼2014-09-04 12:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghjzero

木虫 (正式写手)
有可能是细胞本身状态的问题~~~
赞一下 回复此楼
Just do it!
14楼2014-09-04 15:41:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luse_91

新虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ghjzero at 2014-09-04 15:41:02
有可能是细胞本身状态的问题~~~

可能吧。细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋啊！
赞一下 回复此楼
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
15楼2014-09-04 16:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的时候有离心么? 有的细胞要离心转速很低, 不然会挂.
赞一下 回复此楼
16楼2014-09-06 03:13:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luse_91

新虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 03:13:39
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的 ...

离的，1000rpm，for 5 minutes at 25 度
赞一下 回复此楼
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
17楼2014-09-07 14:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-07 14:16:20
离的，1000rpm，for 5 minutes at 25 度...

能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的.
赞一下 回复此楼
18楼2014-09-09 08:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Luse_91

新虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 08:24:47
能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的....

细胞的培养条件不是37度吗？这样是不是过渡得太多呀！
赞一下 回复此楼
念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
19楼2014-09-09 13:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-09 13:59:37
细胞的培养条件不是37度吗？这样是不是过渡得太多呀！...

不是的, 我说的是复苏的时候. 你从液氮拿出来,化了在4度离心取上清,然后重悬起来. 再培养.
赞一下 回复此楼
20楼2014-09-10 08:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Luse_91 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +7 Isak0320 2026-10-12 10/500 2026-10-12 22:38 by 大飞鱼鱼鱼
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭