为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？ - 生物科学 - 细胞科学

11楼2014-09-03 14:37:40

Luse_91

新虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3953.3
散金: 955
红花: 4
帖子: 1218
在线: 224小时
虫号: 3233203
注册: 2014-05-25
专业: 中药神经精神药理

引用回帖:

10楼: Originally posted by 思行1993 at 2014-09-03 00:28:49
复苏方法是怎样的？你是冻存液直接补液培养第二天换液，还是离心再培养，一般我选择前者，效果还不错啊，你复苏的时候是在冰点时间留长了？

速溶——加1ml培养基——离心——重悬——培养，都是从液氮罐拿出来就拿到37度水浴速溶。复苏应该是没有问题，就是在冻存的时候，不知道除了什么问题，我拿别人的细胞来复苏就挺好的！

念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点

12楼2014-09-04 12:43:00

Luse_91

新虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3953.3
散金: 955
红花: 4
帖子: 1218
在线: 224小时
虫号: 3233203
注册: 2014-05-25
专业: 中药神经精神药理

引用回帖:

11楼: Originally posted by cheaiyang at 2014-09-03 14:37:40
是不是冻存的时候吹打的太厉害了，对细胞有伤害

但是，同样的细胞我拿别人的细胞来复苏的时候，活细胞也很多的，就是我自己冻的就不行了！

念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点

13楼2014-09-04 12:43:58

ghjzero

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 6278.6
红花: 1
帖子: 396
在线: 56.6小时
虫号: 1885877
注册: 2012-07-10
专业: 细胞增殖、生长与分化

有可能是细胞本身状态的问题~~~

Just do it!

14楼2014-09-04 15:41:02

Luse_91

新虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3953.3
散金: 955
红花: 4
帖子: 1218
在线: 224小时
虫号: 3233203
注册: 2014-05-25
专业: 中药神经精神药理

引用回帖:

14楼: Originally posted by ghjzero at 2014-09-04 15:41:02
有可能是细胞本身状态的问题~~~

可能吧。细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋啊！

念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点

15楼2014-09-04 16:51:37

xipha

木虫 (正式写手)

应助: 41 (小学生)
金币: 4332.1
红花: 12
帖子: 881
在线: 160.1小时
虫号: 447837
注册: 2007-11-01
专业: 生物化学

我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的时候有离心么? 有的细胞要离心转速很低, 不然会挂.

16楼2014-09-06 03:13:39

Luse_91

新虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3953.3
散金: 955
红花: 4
帖子: 1218
在线: 224小时
虫号: 3233203
注册: 2014-05-25
专业: 中药神经精神药理

引用回帖:

16楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 03:13:39
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的 ...

离的，1000rpm，for 5 minutes at 25 度

念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点

17楼2014-09-07 14:16:20