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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？
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Luse_91

新虫 (著名写手)

[求助] 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？已有1人参与

如题，我的冻存液是培养基：FBS：DMSO=7：2：1，而且陪玩也放回四度冷却了，冻存盒用之前也平衡到室温了，但是复苏出来之后，细胞活着的还是只有几个。我就不明白了这是怎么回事？各位大神能否帮我解惑？谢谢~~
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念只念那相遇的一瞬间为你把时空穿越怨莫怨这含泪的一双眼转眼间沧海桑田念的怨的都说爱是自己的信念翻云手手中月聚了散了才知缘是凡心一点
1楼2014-09-02 10:47:36
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xipha

木虫 (正式写手)
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的时候有离心么? 有的细胞要离心转速很低, 不然会挂.
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16楼2014-09-06 03:13:39
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-07 14:16:20
离的，1000rpm，for 5 minutes at 25 度...

能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的.
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18楼2014-09-09 08:24:47
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-09 13:59:37
细胞的培养条件不是37度吗？这样是不是过渡得太多呀！...

不是的, 我说的是复苏的时候. 你从液氮拿出来,化了在4度离心取上清,然后重悬起来. 再培养.
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20楼2014-09-10 08:40:14
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xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by Luse_91 at 2014-09-10 11:47:54
哦哦，这个倒是真没注意！...

这个步骤蛮关键的.
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22楼2014-09-12 04:08:10
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