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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？
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Luse_91

新虫 (著名写手)

[求助] 为什么我冻存的细胞复苏出来活的细胞很少？已有1人参与

如题，我的冻存液是培养基：FBS：DMSO=7：2：1，而且陪玩也放回四度冷却了，冻存盒用之前也平衡到室温了，但是复苏出来之后，细胞活着的还是只有几个。我就不明白了这是怎么回事？各位大神能否帮我解惑？谢谢~~
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1楼2014-09-02 10:47:36
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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2楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 13:41:46
1.我通常用的冻存液都是FBS：DMSO=9:1，这样虽然比较费血清，但冻存效果很好。你换这个冻存液试试，看看是不是冻存液不好。
2.冻存的密度也有影响，也许你可以试试冻大一点的密度。

我细胞冻存得很多，就是复苏出来活着的不多，我冻存的跟他们的都是一样的做法，我就不明白，别人的细胞复苏出来很好啊，就我的有问题。
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3楼2014-09-02 14:47:35
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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4楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 15:21:19
会不会是你的细胞本身状态不好？...

我冻过两种细胞都是这样子，复苏出来都是只有一点点活着的细胞，好纠结的说这个问题。。我觉得细胞状态挺好的，可能就是稍微有点密吧，快到90%。
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5楼2014-09-02 15:27:13
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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6楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 16:13:13
=。=好吧。但90%我觉得还好，我经常都是差不多这个密度的时候才冻的。。。...

哦，养细胞感觉好苦逼，经验+rp啊，缺一不可！！还是癌细胞好养，随便养。
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7楼2014-09-02 16:45:30
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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8楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-09-02 16:47:38
是啊，我刚开始养的时候也是各种问题。。...

纠结死了，细胞养到中间才加双抗，会不会对细胞造成呀？我最近在养bEnd.3细胞，一开始没加双抗，后面加了，然后细胞完全变形了。我不知道是不是这个原因，前面状态都很好的，后面细胞都没有原来的形态了，变成那种亮亮的，偏圆形的细胞了。
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9楼2014-09-02 17:23:36
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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10楼: Originally posted by 思行1993 at 2014-09-03 00:28:49
复苏方法是怎样的？你是冻存液直接补液培养第二天换液，还是离心再培养，一般我选择前者，效果还不错啊，你复苏的时候是在冰点时间留长了？

速溶——加1ml培养基——离心——重悬——培养，都是从液氮罐拿出来就拿到37度水浴速溶。复苏应该是没有问题，就是在冻存的时候，不知道除了什么问题，我拿别人的细胞来复苏就挺好的！
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12楼2014-09-04 12:43:00
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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11楼: Originally posted by cheaiyang at 2014-09-03 14:37:40
是不是冻存的时候吹打的太厉害了，对细胞有伤害

但是，同样的细胞我拿别人的细胞来复苏的时候，活细胞也很多的，就是我自己冻的就不行了！
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13楼2014-09-04 12:43:58
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Luse_91

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14楼: Originally posted by ghjzero at 2014-09-04 15:41:02
有可能是细胞本身状态的问题~~~

可能吧。细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋啊！
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15楼2014-09-04 16:51:37
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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16楼: Originally posted by xipha at 2014-09-06 03:13:39
我一般是用1:1 FBS, 细胞起不来有可能是
1. 染菌了. 支原体, 细菌, 酵母....
2. 保种的时候活力不好. 一般是单层90%左右保种. 过密的话有的细胞就不那么好了.
3. 冻存太久了. 有时候就复苏不起来了.
4. 你复苏的 ...

离的，1000rpm，for 5 minutes at 25 度
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17楼2014-09-07 14:16:20
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Luse_91

新虫 (著名写手)
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18楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 08:24:47
能4度就4度, 然后应该是200-300g 不知道你们转头是多大的....

细胞的培养条件不是37度吗？这样是不是过渡得太多呀！
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19楼2014-09-09 13:59:37
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