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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 连续复苏了几种细胞都死亡了，大家帮忙分析下原因吧，谢谢
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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晨霭微凉

金虫 (小有名气)

[求助] 连续复苏了几种细胞都死亡了，大家帮忙分析下原因吧，谢谢 已有6人参与

不知道什么原因，最近实验室养的细胞状态都不是很好，其他师姐的细胞状态也不好。然后我已经把细胞房、孵箱打扫消毒，培养基也重配了，最近复苏的细胞（一年前冻存的）还是死了，没有明显的染菌现象。不知道什么原因，请问大家有没遇到这种状况，怎么解决?谢谢！
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1楼 2014-07-11 15:01:09
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专领金币

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨霭微凉: 金币+2, ★有帮助 2014-07-12 11:16:41
晨霭微凉: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 17:08:54
具体原因还真不好说。按理来说，细胞全部死亡很少见。我解冻3年前的细胞都没什么问题。有可能你之前冷冻的方法有失误导致细胞冷冻的时候就死了。你回忆一下，同一批次冷冻的细胞，以前解冻的时候是否发生死亡现象，如果以前没有发生，那就排除冷冻时照成细胞的死亡。如果实验室不干净的话，可能照成细胞污染，但你说没有污染迹象，说明细胞还是在解冻及培养方面有问题，一般解冻没什么大问题。好好检查培养液，是不是个别药品过期了，或是血清更换了，还是其他原因。
有时候实验就这样，一段时间不明原因的不好，过了这段时间又好了起来。很奇怪的。
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2楼2014-07-11 15:40:02
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j1234555jhh

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨霭微凉: 金币+2, ★有帮助 2014-07-12 11:16:59
晨霭微凉: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 17:08:35
冻存细胞复苏不成功，1.是否冻存于液氮，2.冻存液的配置是否有问题，3.冻存时细胞的活力是否最佳。
细胞在-70度冰箱中貌似只能保存一年时间，冻存液的比例是培养基（含血清）：DMSO=9:1，细胞活力在细胞长至70%-80%时最佳。
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3楼2014-07-11 16:35:08
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精诚

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一年时间有点长了，PS:最近在实验室没得罪谁吧
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4楼2014-07-12 00:30:50
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yinhl623

木虫 (小有名气)
血清、培养基是否和原来的同厂家或同批次？纯水机有没出问题？培养基的pH是否合适？有没在孵箱内加水盘？孵箱的温度、湿度、二氧化碳浓度调节功能是否正常？细胞房旁边有没有进行涉及挥发性很大的有毒化学试剂的实验？
      建议：首先检查培养基、血清是否过期，然后检查去离子水的电阻等值（纯水机上有显示），再检查孵箱功能调节是否正常，然后找同学借一瓶传代后尚未长满的细胞，用你新配的培养基养1~2天看下细胞有没异常，若异常，很可能是你的培养基或血清有问题（原料、水、pH都有可能），依次排查；若细胞无异常，建议将此种细胞按你以前的步骤冻存，隔天后即可按你的原来的步骤进行复苏，看细胞有无问题；若有问题，换DMSO或者反思自己的冻存、复苏步骤是否有问题；若无问题，找个人帮你复苏你以前的细胞；逐步排查肯定能找到问题症结。
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5楼2014-07-12 01:37:16
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tinypotato

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
极有可能曾经液氮干了~
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6楼2014-07-12 16:31:10
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
冻存操作有问题，如果要重新冻存细胞，DMSO建议换掉。
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自然如此美丽！
7楼2014-07-14 09:00:49
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
内容已删除
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8楼2014-07-14 09:31:46
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个

【答案】应助回帖

★ ★
晨霭微凉: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-06 17:09:12
是不是你的血清有点少，或者有问题，在刚复苏的时候，可以适当的多点血清。
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奇迹源于自信，脚踏实地！
9楼2014-07-15 11:15:47
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