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梁顺涛

金虫 (小有名气)


[交流] 如何提高细胞原代培养细胞的产量?

各位师兄师姐,我最近在做小鼠骨髓来源的巨噬细胞的体外分化,用含M-csf的DMEM(10%FBS)的培养基培养小鼠骨髓细胞,中间3天后换次液,7天后收集,但是每次收集的细胞数都不多,5只老鼠,最后也就手机6——7*10^6个/ML,请问该怎么处理才能提升细胞产量啊?
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a070274011

新虫 (初入文坛)


★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-26 20:29:25
原代培养最怕染菌,首先一定要做到无菌条件,取下的组织要依次经过酒精,含双抗缓冲液(PBS或D-HANKS),不含双抗缓冲液,漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好,一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一定要在所培养的细胞所需的范围内,原代一般加入20的血清(胎牛血清要好于小牛血清)。牛血清可以在中国实验室耗材网biolabware.cn购买
2楼2014-01-17 14:59:16
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wolfman840

木虫 (正式写手)


★ ★
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-26 20:29:33
换液用的离心方法还是自然沉降?牛血清质量也很关键的。不一定大牌子的就好,得看你实际用下来的结果。一般15~20%牛血清。
3楼2014-01-17 15:08:06
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梁顺涛

金虫 (小有名气)



137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-01-26 20:29:43
引用回帖:
2楼: Originally posted by a070274011 at 2014-01-17 14:59:16
原代培养最怕染菌,首先一定要做到无菌条件,取下的组织要依次经过酒精,含双抗缓冲液(PBS或D-HANKS),不含双抗缓冲液,漂洗数次。再者就是在剪碎组织时应该是越碎越好,一般要剪20-30分钟。最后就是培养液的PH一 ...

放酒精里可以理解,但是用含双抗的缓冲液冲洗就没有必要了吧?双抗是通过阻断细菌增值而起作用的,用它漂洗短时间内是不是起不到抑菌的作用?要剪碎的组织能有多大?会用20到30分钟吗?这么长的时间细胞会不会死亡啊?
5楼2014-01-18 11:36:21
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梁顺涛

金虫 (小有名气)



137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2014-01-26 20:29:49
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:08:06
换液用的离心方法还是自然沉降?牛血清质量也很关键的。不一定大牌子的就好,得看你实际用下来的结果。一般15~20%牛血清。

谢谢啊!我在大皿里培养,换液时直接将原培养基弃掉,滴管吸PBS沿大皿内壁缓慢加入,然后“十”字形晃动培养皿弃掉PBS,重复2到3次,然后加上新的培养基,方法和加PBS一样。血清是进口FBS的,我用的浓度是10%。
6楼2014-01-18 11:41:55
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wolfman840

木虫 (正式写手)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 梁顺涛 at 2014-01-18 11:41:55
谢谢啊!我在大皿里培养,换液时直接将原培养基弃掉,滴管吸PBS沿大皿内壁缓慢加入,然后“十”字形晃动培养皿弃掉PBS,重复2到3次,然后加上新的培养基,方法和加PBS一样。血清是进口FBS的,我用的浓度是10%。...

血清加到15%试试,换液时候要留一点时间让细胞沉一下,别晃完就倒了。
7楼2014-01-24 16:03:33
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-24 16:03:33
血清加到15%试试,换液时候要留一点时间让细胞沉一下,别晃完就倒了。...

嗯 ,好的 ,来年试试。
8楼2014-01-25 21:28:57
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treetreew

木虫 (小有名气)



梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
冲出来的?

好像差不多就这么多细胞,不算少了
9楼2014-01-26 10:08:39
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


引用回帖:
9楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-26 10:08:39
冲出来的?

好像差不多就这么多细胞,不算少了

不多啊,老师说她以前做的时候,4只小鼠就能收获1-2*10^7个。
10楼2014-01-27 00:28:16
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treetreew

木虫 (小有名气)


我记得我冲出来是10的5次方数量级,一只老鼠,比你少多了
细胞够做实验就好,多了不见得是好事儿
11楼2014-01-27 07:23:05
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-27 07:23:05
我记得我冲出来是10的5次方数量级,一只老鼠,比你少多了
细胞够做实验就好,多了不见得是好事儿

我的是不够用,我的实验条件比较多,一次得用96孔板,每孔10的5次方个
12楼2014-01-27 20:25:57
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by treetreew at 2014-01-27 07:23:05
我记得我冲出来是10的5次方数量级,一只老鼠,比你少多了
细胞够做实验就好,多了不见得是好事儿

你的肯定冲出来的少
13楼2014-01-27 20:26:43
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我肚子好饿

禁虫 (初入文坛)


梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

14楼2018-10-29 20:25:13
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2014-01-17 21:27   回复  
梁顺涛(金币+1): 谢谢参与
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