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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 组织块贴壁法培养细胞如何做？
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhaohq1209: 金币+3, BioEPI+1, telomerase: 金币+4, 欢迎新虫！！！ 欢迎多多交流！！ 2012-05-09 09:13 2012-05-09 10:02:03
很久以前做的，做法如下：
实验所要用的工具都应灭菌消毒。首先，在实验前24h于60×15mm的培养皿内铺上血清，将铺有血清的培养皿放入细胞培养箱内。。。。。。组织取出，用PBS将其冲洗干净。将组织切割成1mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当的向组织上滴1～2滴培养液，以保持湿润。然后，将剪切好的组织块用眼科镊均匀铺于事先准备好的培养皿内,加入少量含20％胎牛血清的DMEM培养液，以组织块不在培养液内漂浮为宜，然后把培养皿放置在37℃培养箱内。放置2～4h后待组织小块贴附于培养皿，加入含20％胎牛血清的DMEM培养液，在37℃含5%的CO2的条件下培养，待1～2天后细胞由组织中游出，摘掉组织块并用PBS清洗培养皿去除死细胞和组织残留物，加入培养液继续培养。待培养皿中的细胞长满后用胰蛋白酶将其消化下来，转入50ml的塑料培养瓶中培养，此时的细胞我们称其为原代。。。。细胞。

至于纯化，我做的是肺的，细胞相对含量不复杂，我要的细胞含量很高，所以穿几代，就纯化得差不多了。  要是肝的，那就不好做了。。。。。
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-05-09 09:13:08
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