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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 如何用悬浮细胞做激光共聚焦
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懵懂小魔女

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何用悬浮细胞做激光共聚焦 已有1人参与

各位大神~大家好，我现在遇到个棘手的问题需要帮助哦
我要用THP-1做conforcal，可是THP-1这家伙是悬浮的细胞，已经做了几次预实验了都无法观察。
我试过了每次染色，洗涤全部离心的方法，（最后一步再滴加到盖玻片上）可是在最后封的片子里面细胞还是游动的，无法观察。
求助，求助哦，怎么办呢！？？？
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不放弃，不妥协
1楼 2014-07-11 09:47:16
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-11 11:03:06
先滴加到玻片上，风干，再甲醛固定，进行后面操作。比贴壁生长的细胞容易掉，小心的话还是有些固定在玻片上。
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2楼2014-07-11 10:05:43
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懵懂小魔女

铜虫 (初入文坛)
内容已删除
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不放弃，不妥协
3楼2014-07-11 10:09:49
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
固定后再进行其它染色

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-11 10:16:06
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
懵懂小魔女: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢^_^ 2014-07-14 10:19:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 懵懂小魔女 at 2014-07-11 10:09:49
我要染DAPI还有两个亚显微结构的抗体，是全部染色之前固定么？
我算了下洗涤一共需要6次，一抗，二抗各两个，还有DAPI和渗透各一次。...

洗涤可以参考这篇文献的方法，抗体孵育最好不要摇动，这样做不会完全脱落。
没试过染色后再固定。
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  • 附件 1 : DuanYLetal(ABBS)2012.pdf
    • 2014-07-11 10:18:49, 328.35 K
5楼2014-07-11 10:18:54
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零落一地的风

铜虫 (小有名气)
你好，想问一下，最后激光共聚焦你做了吗？
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6楼2016-11-07 19:15:15
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叉叉欢喜王八

新虫 (初入文坛)
你好，请问你共聚焦最后做成功了吗？我也想做，但是悬浮细胞粘不到片子上
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7楼2017-11-23 18:59:13
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