| 查看: 8006 | 回复: 9 | ||||
[求助]
亚细胞定位研究——激光共聚焦显微镜拍照问题 已有2人参与
|
|
目前进行亚细胞定位研究，提取拟南芥叶肉原生质体进行PEG转化。研究目标采用GFP/YFP融合蛋白，但是在LSM710观察时，叶绿体有很明显的背景，尽管有些细胞是明显看到了GFP荧光，远远强于叶绿体背景，但是拍的照片只看得出叶绿体的形状。细胞器marker选择了mCherry，是参考了文献的做法。但是红色荧光和叶绿体自发荧光重合了，共聚焦室的老师说无法区分。因为对共聚焦显微镜完全没有经验，但是期望得到文献中漂亮的图片，希望能得到高手的帮助。 在文献中以下几种类型： 第一种（1）是GFP和mCherry都没有叶绿体自发荧光，单独的叶绿体自发荧光为蓝色，可以三种颜色merge； 第二种（2）是GFP和RFP都没有叶绿体自发荧光，图片中不体现叶绿体； 第三种（3）是叶绿体自发荧光为红色，目标为GFP. 请问LSM 710 能实现以上几种效果吗。该如何实现呢？  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 激光共聚焦显微镜 | 植物学 |
» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有193人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助关于共聚焦显微镜图片和eds分析图片加标的问题
已经有3人回复
- 激光共聚焦显微镜的图片处理
已经有5人回复
- 【软件】处理激光共聚焦显微镜图像的软件
已经有142人回复
- 激光扫描共聚焦显微镜
已经有5人回复
- 用激光共聚焦显微镜观察材料表面粘附的细菌，荧光染料如何选择？
已经有7人回复
- 电镜与激光共聚焦显微镜在观察细胞凋亡方面的应用
已经有10人回复
- 荧光标记蛋白一般固定在什么载体上，可用激光共聚焦显微镜检测？
已经有7人回复
- 激光共聚焦显微镜观察微生物菌落具体怎么操作？
已经有11人回复
- 激光共聚焦显微镜对载体表面荧光标记蛋白质能定量吗？
已经有6人回复
- 【软件+教程】Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册及 Zeiss LSM Image Browser
已经有165人回复
- 激光共聚焦显微镜观察烟草中的GFP蛋白
已经有7人回复
- 求助] 怎么用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察植物组织中叶绿体的分布?
已经有14人回复
- 激光共聚焦显微镜看GFP的波长是多少
已经有5人回复
- 【求助/交流】激光共聚焦显微镜显微镜
已经有6人回复
- 【求助/交流】激光共聚焦显微镜观察蓝藻中钙离子的分布用什么钙离子指示剂好呀？
已经有4人回复
- 【求助/交流】有没有可以在细胞中定位的荧光蛋白
已经有9人回复
- 激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）可以定量检测细胞凋亡率吗？
已经有9人回复
- 激光共聚焦荧光显微镜价格
已经有5人回复
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - APEPI: 64
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
2楼2013-06-04 16:43:15
xy656691
金虫 (正式写手)
- APEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 0.248
- 金币: 1404.8
- 散金: 772
- 红花: 12
- 帖子: 751
- 在线: 158.2小时
- 虫号: 1681902
- 注册: 2012-03-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
楼主扫的图片不错啊 3楼2013-06-04 23:01:42
4楼2013-06-15 11:57:00
5楼2013-07-01 09:56:55
6楼2013-07-01 09:58:02
7楼2013-09-26 15:21:47
8楼2013-09-26 16:27:39
【答案】应助回帖
|
在510和710上都能够区分开的，GFP、mCherry、自发荧光间都能分开，如果你想使用自发荧光做为其中的一种marker，那么它和GFP共定位时均使用488激发，选择Fast模式，然后调节你的发射光光谱，将两种荧光的发射光光谱尽量远离，你可以在protoplast的GFP通道上看到叶绿体区域是很明显的黑色，而自发荧光的通道上则可以使用magenta或red色。而mCherry和自发荧光共定位时，同理，最好选择Best模式，这样激发光可以选择两个通道。GFP和mCherry共定位也是一样的道理，选择Best模式。 如果觉得效果不好，无法区分，那就使用lamda模式进行扫描，可以将自发荧光的发射光谱扫描出来，然后抽取其中能与GFP或者mCherry完全分开的那个通道进行取图。 |
9楼2014-01-11 09:15:50
10楼2015-05-03 11:13:11
