应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 激光扫描共聚焦显微镜
61/1返回列表
查看: 2034  |  回复: 5
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lushuiw

银虫 (正式写手)

[求助] 激光扫描共聚焦显微镜

我想用激光扫描共聚焦显微镜观察果肉细胞中的钙离子，样品采回来，该咋处理？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验技术、方法交流 Biological 激光共聚焦显微镜

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-08-19 11:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

ll9999

专家顾问 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-08-19 20:10:21
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-19 20:10:28
lushuiw: 金币+2 2012-08-20 08:26:13
影响成功率和准确性的因素较多 ，建议看看这篇文章可能有帮助。http://mall.cnki.net/magazine/Article/YLSX200106003.htm
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-19 19:06:40
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lushuiw

银虫 (正式写手)
请大家帮帮忙啊！
回复此楼
2楼2012-08-19 16:55:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ll9999 at 2012-08-19 19:06:40
影响成功率和准确性的因素较多 ，建议看看这篇文章可能有帮助。http://mall.cnki.net/magazine/Article/YLSX200106003.htm

多谢了，你有植物方面的吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-19 21:18:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gigiloveu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2012-08-20 08:26:03
三.动态测量
l  Physiology:细胞内离子动态变化测量
1).游离Ca2+测量
检测游离Ca2+变化荧光探针的原理：这类探针多为Ca2+螯合剂，不与Ca2+结合时不发荧光，通常也不能进入细胞膜，只有与乙酰甲酯AM相连方可进入细胞内，被细胞内酯酶水解后并与胞内游离钙结合后发出荧光。Kd值为Ca2+解离常数，表明检测Ca2+浓度的范围:0.1xKd-10xkd, Kd和很多因素有关，如pH、 Mg2+、与蛋白的结合、温度等。细胞内生理Ca2+浓度值(10-100n M)，细胞内Ca2+超载浓度值（基础Ca2+浓度的10倍左右）
  荧光探针 激发波长   发射波长 Kd
FLuo3-AM, K+, dextran 506nm   525nm 390nM   
Fluo4       506nm    525nm      
Calcium Green-1 507nm   530nm 190nM
Calcium Green-2   507nm   535nm 550nM
Fura red     420/480nm   637nm 140nM
Oregon Green 488   494nm   520nm   20,000nM
Calcium Crimson   583nm   602nm 328nM
Indo-1     356nm 405/458nm 230nM
Fura-2       340/380 476nm 145nM

l  相对 测量
         
   DF/F=(F-Fbase)/(Fbase-FBG)
l  Ca2+浓度绝对测量
l  单波长公式法
Fluo3: 530nm Kd=450nM

[Ca2+]I =Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)

Fmin: 细胞内无钙时的荧光强度( MnCl2)
Fmax：细胞内钙饱和时的荧光强度(A23187)
•  测量时切记细胞内静息Ca2+浓度的相对荧光强度值不能太低（F值不低于40）

细胞内生理Ca2+浓度值（10-8 -10-7 M）
细胞内Ca2+超载浓度值（基础Ca2+浓度的10倍左右）
•  标准曲线法
根据仪器条件和负载条件，以不同Ca2+浓度的Buffer(EGTA- Ca2+)做标准曲线，横轴为Ca2+浓度，纵轴为荧光强度
•  比例荧光的测量

.双波长(比例荧光：ratio)
Indo1(360, 420/480), fura2(340/380, 440)

[Ca2+]I =Kd(R-Rmin)/(Rmax-R)Ff2/Fs2
•  细胞器的Ca2+测量
1.线粒体内游离Ca2+测量
Fluo-3 + TMRM(线粒体荧光探针，红色）
2. 特异定位的重组水母发光蛋白
水母发光蛋白与 Ca2+结合后发蓝光
用含有水母发光蛋白和含有特定细胞器蛋白的表达载体转染细胞，可测定亚细胞器内的游离Ca2+变化   
目前已商品化的探针可检测：线粒体、内质网、细胞核内的游离Ca2+，因生物发光很弱不能使用Confocal检测

细胞内游离Ca2+测量的应用

l  钙的特性
1．细胞内外的电化学梯度103-104倍
2．细胞膜渗透性稍有改变或钙库释放稍有增加，导致胞内钙
明显升高
3．细胞内钙为细胞激活“开关”

l  细胞内钙的生理作用
1．肌肉的兴奋收缩-收缩偶联
2．神经递质的释放
3．学习记忆的增强
4．卵子受精
5．细胞分裂和再生
6．细胞调亡
7．细胞间通讯

8．细胞信号传导
9. DNA合成
10. 基因表达

l  细胞内钙超载与疾病

1．高血压、脑缺血、心脏病、内分泌病—胞内钙浓度异常
2．糖尿病、风湿性关节炎、多发性硬化病—胞内钙浓度增高
3．人体缺钙—骨钙大量丢失，神经细胞的钙浓度增高
4．老化和老年性痴呆-神经细胞内钙浓度增高
细胞内生理Ca2+浓度值（10-8 -10-7 M）
细胞内Ca2+超载浓度值（基础Ca2+浓度的10倍左右）

五.荧光漂白恢复(FRAP: Fluorescence Recover after photobleaching）
定义:经荧光探针标记的细胞的某一区域一旦被高强度的
激光照射后,荧光物质的光化学结构被迫坏,荧光强度
下降, 且为不可逆的过程, 但此处荧光强度会渐渐恢
复, 荧光强度和恢复的快慢和多少,代表周围分子扩散
的速率, 或分子运动速度。

R=(I2-I1 /I0-I2)´100%
R-荧光漂白恢复率：代表分子的运动速度
应用：细胞间通讯， 细胞膜流动性，蛋白分子的运动
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-08-19 22:19:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-08-19 22:19:49
三.动态测量
l  Physiology:细胞内离子动态变化测量
1).游离Ca2+测量
检测游离Ca2+变化荧光探针的原理：这类探针多为Ca2+螯合剂，不与Ca2+结合时不发荧光，通常也不能进入细胞膜，只有与乙酰甲酯AM相连方可进入细 ...

虽然关系不大，还是多谢你了！
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-20 08:25:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lushuiw 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭