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xiaoqin12

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】有没有可以在细胞中定位的荧光蛋白

有没有一种荧光蛋白可以连在目标蛋白上,使其能在细胞中定位,比如GFP可不可以
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)


xiaoqin12(金币+2):第一个回帖,谢谢 2010-11-11 12:02:16
可以啊 GFP EGFP 都可以,EGFP信号强一些
2楼2010-11-10 20:07:47
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xiaoqin12

新虫 (初入文坛)


是可以看到定位在细胞膜或者是核糖体这种细胞器上吗,那可以定量吗
3楼2010-11-10 21:37:09
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magy2006

木虫 (著名写手)


一般都是用GFP或是GUS吧,植物中的
4楼2010-11-11 08:44:23
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★ ★
lstt09nk(金币+2):言之有理 2010-11-11 12:41:42
1、构建融合表达质粒
2、免疫荧光

两者都需要共聚焦显微镜来看
5楼2010-11-11 09:14:55
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randomqd

木虫 (小有名气)


看一下H2B GFP

H2B定位在细胞核。。。
细胞中H2B GFP的融合蛋白就可以使细胞核发GFP了。。
在百度搜一下H2B GFP就可以
6楼2010-11-11 10:19:49
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)


GFP可以用,不过观察麻烦些,有时组织会自发荧光不容易做。做植物还是用GUS好一些
7楼2010-11-11 10:35:02
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gaolef4s

金虫 (正式写手)


xiaoqin12(金币+3):挺清楚的 2010-11-11 12:01:54
也有用luciferase的,现在普遍都用GFP,高效稳定!GFP本身不定位,主要是融合蛋白的定位!不同的蛋白前导肽存在的部位不同,一般在N端,也有在中间和C端的,比如内质网滞留信号就在C端。具体定位在哪个细胞器,在做实验之前需要好好研究一下。如果前导肽在C端,那么GFP融合在N端,如果前导肽在N端,那么GFP融合在C端,在中间,就无所谓了!
我最近在做BIFC,也是应用GFP的一种技术,研究蛋白质互作和亚细胞定位!欢迎交流!
8楼2010-11-11 10:46:50
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gaolef4s

金虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 08:30:32
像内质网定位和细胞核定位也不一定需要共聚焦,落射荧光显微镜就足够了!当然共聚焦的图片会好看点,如果有双光子那就更漂亮了!
9楼2010-11-11 10:49:27
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jAnmee

银虫 (正式写手)


★ ★
dhd997(金币+2):很活跃,鼓励 2010-11-13 08:30:44
GFP融合蛋白很麻烦吧。。直接买那个蛋白质的荧光抗体不就得了。。
如果要检查的蛋白质不常见再考虑用GFP吧。。。
10楼2010-11-13 06:34:49
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