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xiaoqin12

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有没有可以在细胞中定位的荧光蛋白

有没有一种荧光蛋白可以连在目标蛋白上，使其能在细胞中定位，比如GFP可不可以
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1楼 2010-11-10 20:03:49
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
xiaoqin12(金币+2):第一个回帖，谢谢 2010-11-11 12:02:16
可以啊 GFP EGFP 都可以，EGFP信号强一些
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2楼2010-11-10 20:07:47
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xiaoqin12

新虫 (初入文坛)
是可以看到定位在细胞膜或者是核糖体这种细胞器上吗，那可以定量吗
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3楼2010-11-10 21:37:09
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magy2006

木虫 (著名写手)
一般都是用GFP或是GUS吧，植物中的
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4楼2010-11-11 08:44:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2):言之有理 2010-11-11 12:41:42
1、构建融合表达质粒
2、免疫荧光

两者都需要共聚焦显微镜来看
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5楼2010-11-11 09:14:55
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randomqd

木虫 (小有名气)

看一下H2B GFP

H2B定位在细胞核。。。
细胞中H2B GFP的融合蛋白就可以使细胞核发GFP了。。
在百度搜一下H2B GFP就可以
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6楼2010-11-11 10:19:49
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
GFP可以用，不过观察麻烦些，有时组织会自发荧光不容易做。做植物还是用GUS好一些
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7楼2010-11-11 10:35:02
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gaolef4s

金虫 (正式写手)
xiaoqin12(金币+3):挺清楚的 2010-11-11 12:01:54
也有用luciferase的，现在普遍都用GFP，高效稳定！GFP本身不定位，主要是融合蛋白的定位！不同的蛋白前导肽存在的部位不同，一般在N端，也有在中间和C端的，比如内质网滞留信号就在C端。具体定位在哪个细胞器，在做实验之前需要好好研究一下。如果前导肽在C端，那么GFP融合在N端，如果前导肽在N端，那么GFP融合在C端，在中间，就无所谓了！
我最近在做BIFC，也是应用GFP的一种技术，研究蛋白质互作和亚细胞定位！欢迎交流！
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8楼2010-11-11 10:46:50
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gaolef4s

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 08:30:32
像内质网定位和细胞核定位也不一定需要共聚焦，落射荧光显微镜就足够了！当然共聚焦的图片会好看点，如果有双光子那就更漂亮了！
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9楼2010-11-11 10:49:27
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jAnmee

银虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2):很活跃，鼓励 2010-11-13 08:30:44
GFP融合蛋白很麻烦吧。。直接买那个蛋白质的荧光抗体不就得了。。
如果要检查的蛋白质不常见再考虑用GFP吧。。。
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10楼2010-11-13 06:34:49
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