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七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)

[求助] 亚细胞定位研究——激光共聚焦显微镜拍照问题 已有2人参与

目前进行亚细胞定位研究,提取拟南芥叶肉原生质体进行PEG转化。研究目标采用GFP/YFP融合蛋白,但是在LSM710观察时,叶绿体有很明显的背景,尽管有些细胞是明显看到了GFP荧光,远远强于叶绿体背景,但是拍的照片只看得出叶绿体的形状。细胞器marker选择了mCherry,是参考了文献的做法。但是红色荧光和叶绿体自发荧光重合了,共聚焦室的老师说无法区分。因为对共聚焦显微镜完全没有经验,但是期望得到文献中漂亮的图片,希望能得到高手的帮助。

在文献中以下几种类型:
第一种(1)是GFP和mCherry都没有叶绿体自发荧光,单独的叶绿体自发荧光为蓝色,可以三种颜色merge;

第二种(2)是GFP和RFP都没有叶绿体自发荧光,图片中不体现叶绿体;

第三种(3)是叶绿体自发荧光为红色,目标为GFP.

请问LSM 710 能实现以上几种效果吗。该如何实现呢?
亚细胞定位研究——激光共聚焦显微镜拍照问题
1.jpg


亚细胞定位研究——激光共聚焦显微镜拍照问题-1
2.jpg


亚细胞定位研究——激光共聚焦显微镜拍照问题-2
3.jpg
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激光共聚焦显微镜 植物学

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七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 王晨旭 at 2013-09-26 15:21:47
请问楼主,拍照片之前对样品做了哪些预处理?需要染色剂吗?

我是转的带GFP或mCherry的质粒,没有用染色剂
8楼2013-09-26 16:27:39
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查看全部 10 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
叶绿体自发荧光可以在640-700 nm范围内观察到
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-06-04 16:43:15
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xy656691

金虫 (正式写手)

楼主扫的图片不错啊
3楼2013-06-04 23:01:42
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lsg-ll

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


七八月的阳光: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-09-26 16:36:13
mcherry  与叶绿体 发光谱不一样,  mcherry  可能在610左右忘了,,叶绿体650以上  用多通道,  我们的510可以区分的
人生就像一直虫子,爬呀爬呀
4楼2013-06-15 11:57:00
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