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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 求助] 怎么用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察植物组织中叶绿体的分布?
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swj11123

新虫 (小有名气)

[求助] 求助] 怎么用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察植物组织中叶绿体的分布?

各位生物达人，我现在想用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察植物组织中叶绿体的分布差异,我先想请问一下可以直接就做了植物的横切片和纵切片就放在显微镜下观察活的植物细胞吗？如果可以的话，显微镜的各种参数该如何设置，切片制作又有什么注意点吗？                            由于我是第一次使用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜，所以劳烦各位达人可以把过程写详细一点吗?   谢啦........
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1楼2011-07-04 21:09:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
2487289楼: Originally posted by 本田透1990 at 2013-03-22 17:21:25
我最近也在弄类似的东西，如果你学会了可以给我也传授点经验吗，我实在是不知道应该怎样处理叶片了！

刚巧正在做激光共聚焦的实验，我的样品时烟草和拟南芥，观察GFP和YFP信号，可以用打孔器，打下一小片叶片样品，在10 ml注射器里灌满蒸馏水，将叶片样品放进去，抽吸几次，使叶片内部充满水，再将叶片置于载玻片上，递上几滴水，盖上盖玻片，盖玻片与载玻片两者间用胶水连接，观察即可
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Walnut1
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
10楼2013-03-22 21:48:07
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qiafeixn

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
咸鱼(金币+8): good~ 2011-07-05 20:03:25
swj11123(金币+5): thank you 2011-07-14 09:05:20
叶绿体自带红色荧光，你把显微镜设置成RFP模式下就可以直接观察。用共聚焦显微镜可以直接观察，如果材料不太厚的话，比如叶片，不用做切片。
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2楼2011-07-05 20:01:43
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学大生物

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
1971729楼: Originally posted by qiafeixn at 2011-07-05 20:01:43
叶绿体自带红色荧光，你把显微镜设置成RFP模式下就可以直接观察。用共聚焦显微镜可以直接观察，如果材料不太厚的话，比如叶片，不用做切片。

你好，水稻幼苗叶片不是太厚，但是是否需要固定，让其在一个平面呢？怎么固定呢？请教！
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。。。。。。
3楼2013-01-25 10:26:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
2475458楼: Originally posted by 学大生物 at 2013-01-25 10:26:01
你好，水稻幼苗叶片不是太厚，但是是否需要固定，让其在一个平面呢？怎么固定呢？请教！...

载玻片+盖玻片，用胶水粘合将植物材料夹在中间
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-01-25 18:46:58
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)
激光共聚焦显微镜在国内属于贵重精密仪器，让非专职人员自行操作的不太多见。一般来讲应该是由专职人员替你操作显微镜，你只需要确保样品中需要观察的部位有合适的荧光标记即可。你需要先咨询操作专职人员，所用的显微镜能观察什么波长范围的荧光。
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5楼2013-01-25 21:01:43
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)
像是显微镜参数怎么设置、如何操作这种问题，要么仪器的依托单位的专职操作人员会为你代劳，如果他们容许你自己操作（可能性不太大）也会对你做出详细指示。你担心不会操作，他们更担心你这个非专业人员把仪器弄坏。这种问题不是你应该考虑的。你的任务就是考虑你的样品怎么制备和保存能够达到你的观察目的。
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6楼2013-01-25 21:05:30
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学大生物

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2475622楼: Originally posted by greeneese at 2013-01-25 21:05:30
像是显微镜参数怎么设置、如何操作这种问题，要么仪器的依托单位的专职操作人员会为你代劳，如果他们容许你自己操作（可能性不太大）也会对你做出详细指示。你担心不会操作，他们更担心你这个非专业人员把仪器弄坏。 ...

是的啊，这正是我想问的，在交给操作人员之前，我们要对材料做什么处理呢？比如固定、切片等。。。，激光共聚焦观察叶片叶肉细胞叶绿体，我们要做什么呢？
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。。。。。。
7楼2013-01-25 21:56:41
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2475640楼: Originally posted by 学大生物 at 2013-01-25 21:56:41
是的啊，这正是我想问的，在交给操作人员之前，我们要对材料做什么处理呢？比如固定、切片等。。。，激光共聚焦观察叶片叶肉细胞叶绿体，我们要做什么呢？...

是否固定看你的观察目的了。激光共聚焦显微镜本身不要求固定样品。我们曾用激光共聚焦显微镜直接观察过未经任何处理的血液和松树花粉。原本比较厚的固体样品我估计应该最好切片，让欲观察的表面与光路垂直吧。我们没做过，一般都是看悬浊液状态的样品。
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8楼2013-01-25 22:28:55
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本田透1990

金虫 (小有名气)
我最近也在弄类似的东西，如果你学会了可以给我也传授点经验吗，我实在是不知道应该怎样处理叶片了！
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9楼2013-03-22 17:21:25
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