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1楼2014-01-20 18:12:27

percoll

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【答案】应助回帖

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zhangying720: 金币+2, ★有帮助 2014-01-25 15:17:25

应该不是细胞自身荧光，细胞自身荧光应该很弱，而且分布很弥散，你的图片中荧光在细胞内的分布并不是很均匀，而且比较亮，所以应该不是自身荧光。

2楼2014-01-20 19:12:36

zhangying720

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2楼: Originally posted by percoll at 2014-01-20 19:12:36
应该不是细胞自身荧光，细胞自身荧光应该很弱，而且分布很弥散，你的图片中荧光在细胞内的分布并不是很均匀，而且比较亮，所以应该不是自身荧光。

谢谢亲的回答，亲觉得是表达出来的绿色荧光蛋白是吗？为什么会这样分布呢？商品化的lip2000看着像是整个细胞都有很强的荧光

3楼2014-01-20 20:37:55

yang0071

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【答案】应助回帖

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证明你的蛋白在包浆中弥散分布
没有特异性

4楼2014-01-21 10:29:28

zhangying720

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4楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-21 10:29:28
证明你的蛋白在包浆中弥散分布
没有特异性

没有特异性？不太明白，楼上能具体解释一下吗？拜托了，谢谢！

5楼2014-01-21 10:57:42

percoll

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【答案】应助回帖

楼主是只转的GFP吗？我只知道lipo2000对于难转的细胞，有时转染出来也是这样子，感觉荧光不是很均匀，所以我觉得你自己的试剂的转染效果应该不是很好。建议楼主最好用GFP抗体做western检测一下，这样就放心了。

6楼2014-01-21 14:28:15

zhangying720

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6楼: Originally posted by percoll at 2014-01-21 14:28:15
楼主是只转的GFP吗？我只知道lipo2000对于难转的细胞，有时转染出来也是这样子，感觉荧光不是很均匀，所以我觉得你自己的试剂的转染效果应该不是很好。建议楼主最好用GFP抗体做western检测一下，这样就放心了。

嗯，我的试剂的转染效果是不太好，我是做有机合成的，只是最后做性质时看一下转染效果，目前就想确定一下它确实转染进去了，不是细胞自身荧光就行，我还用FITC-DNA拍过跨膜，能在细胞里看到亮点，但细胞核里很少。网上查的GFP抗体做western检测上好复杂啊，什么材料仪器步骤都没有，估计来不及做了。lipo2000对于难转的细胞也会出现这样的转染效果吗？

7楼2014-01-21 14:55:51

percoll

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7楼: Originally posted by zhangying720 at 2014-01-21 14:55:51
嗯，我的试剂的转染效果是不太好，我是做有机合成的，只是最后做性质时看一下转染效果，目前就想确定一下它确实转染进去了，不是细胞自身荧光就行，我还用FITC-DNA拍过跨膜，能在细胞里看到亮点，但细胞核里很少。 ...

应该是，而且荧光照片的效果跟你制爬片及封片的细节也有关系，western如果自己实验室做不了的话也可以外包给公司，估计也就两三百块钱。

8楼2014-01-21 20:15:10