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懵懂小魔女

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何用悬浮细胞做激光共聚焦 已有1人参与

各位大神~大家好,我现在遇到个棘手的问题需要帮助哦
我要用THP-1做conforcal,可是THP-1这家伙是悬浮的细胞,已经做了几次预实验了都无法观察。
我试过了每次染色,洗涤全部离心的方法,(最后一步再滴加到盖玻片上)可是在最后封的片子里面细胞还是游动的,无法观察。
求助,求助哦,怎么办呢!???
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不放弃,不妥协
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
懵懂小魔女: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢^_^ 2014-07-14 10:19:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 懵懂小魔女 at 2014-07-11 10:09:49
我要染DAPI还有两个亚显微结构的抗体,是全部染色之前固定么?
我算了下洗涤一共需要6次,一抗,二抗各两个,还有DAPI和渗透各一次。...

洗涤可以参考这篇文献的方法,抗体孵育最好不要摇动,这样做不会完全脱落。
没试过染色后再固定。

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  • 附件 1 : DuanYLetal(ABBS)2012.pdf
  • 2014-07-11 10:18:49, 328.35 K
5楼2014-07-11 10:18:54
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查看全部 7 个回答

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-11 11:03:06
先滴加到玻片上,风干,再甲醛固定,进行后面操作。比贴壁生长的细胞容易掉,小心的话还是有些固定在玻片上。
2楼2014-07-11 10:05:43
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

固定后再进行其它染色

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-07-11 10:16:06
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零落一地的风

铜虫 (小有名气)

你好,想问一下,最后激光共聚焦你做了吗?
6楼2016-11-07 19:15:15
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