24小时热门版块排行榜

返回列表

koalading

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3078
帖子: 147
在线: 56.4小时
虫号: 2664683
注册: 2013-09-18
专业: 中药质量评价

[求助] 悬浮细胞MTT法求助已有7人参与

我这个新手最近一直在做脾细胞MTT实验，发现实验重现性很不好，就找了一下原因
1、可能是接种密度的问题
2、后来保证了同时做两块板的细胞相同，可结果还是不好，又找原因可能是加完MTT后有些结晶就吸出来，可是这个度把握不好，不吸干净就会残留培养基影响吸光度。因为条件有限，没有平板离心机，除了吸出来还能怎么办呢？用注射器吸吗？
3、网上查了一下，有人说悬浮细胞可以使用三联溶解液，这样就不用吸出来了，可是我用的96孔板，每个孔已经有100微升悬液和100微升药物，孔的容积已经不够再加100溶解液了，这时候怎么办呢？（前提是药物体积如果加的太少，误差也很大，而且不均匀，所以我没有选择只加10微升，而是配成一定浓度后加100或50微升）

求各位大神帮忙解决一下我的困惑，多谢了

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

MTT得到的细胞存活率和流式（双染）得到的存活率有联系吗已经有5人回复
求助CCK8法测悬浮细胞增殖，如何检测已经有7人回复
关于悬浮细胞MTT的一点疑问，求解答！已经有11人回复
请教关于MTT脾淋巴细胞增殖问题已经有11人回复
用于MTT的肿瘤细胞已经有1人回复
关于细胞毒性MTT实验已经有12人回复
MTT中OD值很大，但细胞密度适中，为什么？已经有6人回复
关于MTT加液与弃液的一些思考与疑问已经有6人回复
【求助/交流】淋巴细胞传代问题已经有4人回复
【求助/交流】MTT法确定药物对细胞的作用浓度范围结果如何分析已经有21人回复
【求助】MTT测试细胞增殖曲线已经有9人回复
【求助/交流】关于MTT检测淋巴细胞活性的若干问题，请教各位大侠~~ 已经有11人回复
【求助/交流】细胞MTT试验DMSO 已经有7人回复
【求助】关于MTT实验的问题请教已经有11人回复
什么是 MTT assay 已经有7人回复

1楼 2013-12-23 15:12:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yinhl623

木虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 2019.1
散金: 24
红花: 5
帖子: 219
在线: 434.7小时
虫号: 1205795
注册: 2011-02-18
性别: GG
专业: 组织工程与再生医学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
koalading: 金币+25, ★★★很有帮助, 不仅对实验有帮助，还从心态上帮助了我，十分感谢 2014-02-20 19:04:01

MTT实验本来准确度就不高，再说你用的是悬浮细胞，不离心的话很多紫色结晶物肯定会随着细胞被吸出来，孔间结果必然会很不均一。建议CCK8，没必要为老板节约这么点钱，老板的基金就是为了做实验用的，早点出成果比节约那点钱对老板更有利。假若老板见你长时间没做出好的结果，他不会考虑到是因为你节约钱才造成这种局面，只会觉得你能力不行，你自己也会越来越不自信，以后要买更贵的试剂就更不敢向老板提了，从此就陷入了越来越被动的怪圈。建议在老板有实验经费的情况下，尽量用好的试剂。至少，在实验结果与预期不符的时候，你可以首先排除试剂的原因，从而更容易找到解决的办法或者发现新的问题。