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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 悬浮细胞MTT法求助
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koalading

木虫 (小有名气)

[求助] 悬浮细胞MTT法求助 已有7人参与

我这个新手最近一直在做脾细胞MTT实验，发现实验重现性很不好，就找了一下原因
1、可能是接种密度的问题
2、后来保证了同时做两块板的细胞相同，可结果还是不好，又找原因可能是加完MTT后有些结晶就吸出来，可是这个度把握不好，不吸干净就会残留培养基影响吸光度。因为条件有限，没有平板离心机，除了吸出来还能怎么办呢？用注射器吸吗？
3、网上查了一下，有人说悬浮细胞可以使用三联溶解液，这样就不用吸出来了，可是我用的96孔板，每个孔已经有100微升悬液和100微升药物，孔的容积已经不够再加100溶解液了，这时候怎么办呢？（前提是药物体积如果加的太少，误差也很大，而且不均匀，所以我没有选择只加10微升，而是配成一定浓度后加100或50微升）
求各位大神帮忙解决一下我的困惑，多谢了
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1楼 2013-12-23 15:12:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yinhl623

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
koalading: 金币+25, ★★★很有帮助, 不仅对实验有帮助，还从心态上帮助了我，十分感谢 2014-02-20 19:04:01
MTT实验本来准确度就不高，再说你用的是悬浮细胞，不离心的话很多紫色结晶物肯定会随着细胞被吸出来，孔间结果必然会很不均一。建议CCK8，没必要为老板节约这么点钱，老板的基金就是为了做实验用的，早点出成果比节约那点钱对老板更有利。假若老板见你长时间没做出好的结果，他不会考虑到是因为你节约钱才造成这种局面，只会觉得你能力不行，你自己也会越来越不自信，以后要买更贵的试剂就更不敢向老板提了，从此就陷入了越来越被动的怪圈。建议在老板有实验经费的情况下，尽量用好的试剂。至少，在实验结果与预期不符的时候，你可以首先排除试剂的原因，从而更容易找到解决的办法或者发现新的问题。
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17楼2013-12-28 15:55:32
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

哦，这样啊，那你可以不做MTT，做MTS，就没那么麻烦了，不用加DMSO，也不用吸上清了。
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I can and I will
5楼2013-12-24 13:33:24
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急速Q7

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本来MTT就不是太准确。我觉得原因很多：最可能的原因还是细胞密度不均匀；确定药品不会和MTT或DMSO有反应？；接种后多久测，中间细胞培养情况；吸的时候过狠，吸出晶体；等等都可能导致重复性差；要是冬天室内温度低，DMSO本身都会产生结晶；
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10楼2013-12-25 23:05:37
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细胞密度不均匀  这估计是最大的影响吧
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Domyallbesttohaveahappylife.
11楼2013-12-25 23:13:33
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普通回帖

koalading

木虫 (小有名气)
多谢多谢
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2楼2013-12-23 18:38:21
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么？？？
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I can and I will
3楼2013-12-24 10:45:41
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koalading

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by caiyifan at 2013-12-24 10:45:41
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么？？？

是呀，不是先把上清液吸出来再加DMSO嘛，但是总能多少吸出部分结晶，肉眼可能看不到
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4楼2013-12-24 12:43:10
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小石头912

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换成CCK8，都不用吸出来了，现在已经很常用，而且灵敏度比MTT更高，你可以上网去查查。
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6楼2013-12-24 16:08:30
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koalading

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小石头912 at 2013-12-24 16:08:30
换成CCK8，都不用吸出来了，现在已经很常用，而且灵敏度比MTT更高，你可以上网去查查。

CCK8不是更贵么？这得问老板了，估计不会同意，因为实验室一直做MTT
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7楼2013-12-25 15:26:10
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koalading

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by caiyifan at 2013-12-24 13:33:24
哦，这样啊，那你可以不做MTT，做MTS，就没那么麻烦了，不用加DMSO，也不用吸上清了。

MTS是？
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8楼2013-12-25 15:28:16
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MTS跟MTT差不多的。只是产生的结晶可溶，就不用DMSO溶了。baidu,你懂的
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I can and I will
9楼2013-12-25 16:22:07
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