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vivian-303

银虫 (正式写手)

[求助] 求助CCK8法测悬浮细胞增殖,如何检测

如题,由于培养的是悬浮细胞,
CCK8法检测细胞增殖能力时,若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可,由于是悬浮细胞,细胞浮在培养液里会影响OD值的检测,平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8,悬浮培养时也采用该体系,若检测时取出一半检测,是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比,能否将细胞悬液取出,离心后进行检测,但由于只有200微升,离心后取出的体积也会损失一些
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caddie1111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 首贴奖励 2013-03-15 06:05:27
为啥在培养液里会影响很大?其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液(一般200ul)一定要分的均一,不能有气泡,然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔,然后每孔加CCK-8(我用20ul),这个量要自己试,有的细胞大 出来颜色会很深 可能会超出酶标仪的范围,然后空白培养基的孔里也加同样体系的CCK-8,然后得出的吸光值减去空白孔的
2楼2013-03-14 17:32:42
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vivian-303

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by caddie1111 at 2013-03-14 17:32:42
为啥在培养液里会影响很大?其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液(一般200ul)一定要分的均一,不能有气泡,然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔,然后每孔加CCK-8(我用20ul),这个量 ...

不是说在培养液里影响大,是说我培养的细胞是悬浮细胞,测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液,细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧
3楼2013-03-15 13:06:09
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4楼2013-03-16 19:09:46
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caddie1111

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by vivian-303 at 2013-03-15 13:06:09
不是说在培养液里影响大,是说我培养的细胞是悬浮细胞,测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液,细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧...

用同样的培养基 然后扣除培养基本身的背景,个人觉得对OD值没什么影响
5楼2013-04-11 16:21:03
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毕业你好

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

【CCK8法检测细胞增殖能力时,若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可】
CCK-8检测贴壁细胞,是不需要将培养液取出的,直接用酶标仪检测度数即可

【由于是悬浮细胞,细胞浮在培养液里会影响OD值的检测,平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8,悬浮培养时也采用该体系,若检测时取出一半检测,是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比,能否将细胞悬液取出,离心后进行检测,但由于只有200微升,离心后取出的体积也会损失一些】
CCK-8比起MTT或者MTS最大的优势就是能够检测悬浮细胞,如果细胞在生长时没有出现团聚,那么孵育完之后可以直接上酶标仪检测
6楼2013-09-11 08:17:20
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fanger

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想说悬浮细胞用药处理的,再要用CCK8检测增的话,不同浓度的药呀,应该要去掉含 药培养基吧?怎么做?平板离心机是多大转速离得下来呢。感觉3500也离不下来
做好自己!
7楼2013-11-28 20:11:41
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changzichao

金虫 (正式写手)

同问,悬浮细胞做CCK8,细胞悬液要不要加血清啊,因为悬浮细胞不能换液,加血清后对OD值有没有影响?
UCANUUP,NOCANNOBB
8楼2015-04-24 14:21:01
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