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vivian-303

银虫 (正式写手)

[求助] 求助CCK8法测悬浮细胞增殖，如何检测

如题，由于培养的是悬浮细胞，
CCK8法检测细胞增殖能力时，若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可，由于是悬浮细胞，细胞浮在培养液里会影响OD值的检测，平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8，悬浮培养时也采用该体系，若检测时取出一半检测，是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比，能否将细胞悬液取出，离心后进行检测，但由于只有200微升，离心后取出的体积也会损失一些
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1楼 2013-03-14 15:02:19
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caddie1111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 首贴奖励 2013-03-15 06:05:27
为啥在培养液里会影响很大？其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液（一般200ul）一定要分的均一，不能有气泡，然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔，然后每孔加CCK-8（我用20ul),这个量要自己试，有的细胞大 出来颜色会很深 可能会超出酶标仪的范围，然后空白培养基的孔里也加同样体系的CCK-8，然后得出的吸光值减去空白孔的
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2楼2013-03-14 17:32:42
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vivian-303

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by caddie1111 at 2013-03-14 17:32:42
为啥在培养液里会影响很大？其实你同比的话应该还好 我做都是细胞处理好重悬 每孔分一样的培养液（一般200ul）一定要分的均一，不能有气泡，然后用你悬细胞的培养液单独加一个孔，然后每孔加CCK-8（我用20ul),这个量 ...

不是说在培养液里影响大，是说我培养的细胞是悬浮细胞，测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液，细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧
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3楼2013-03-15 13:06:09
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凤舞九天54
4楼2013-03-16 19:09:46
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caddie1111

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by vivian-303 at 2013-03-15 13:06:09
不是说在培养液里影响大，是说我培养的细胞是悬浮细胞，测的话取样之前要把培养基打匀之后就成了细胞悬液，细胞在培养基里的话去测OD值会影响结果的吧...

用同样的培养基 然后扣除培养基本身的背景，个人觉得对OD值没什么影响
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5楼2013-04-11 16:21:03
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毕业你好

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

【CCK8法检测细胞增殖能力时，若是贴壁细胞只要将培养液取出测OD值即可】
CCK-8检测贴壁细胞，是不需要将培养液取出的，直接用酶标仪检测度数即可

【由于是悬浮细胞，细胞浮在培养液里会影响OD值的检测，平常所采用的体系为每100微升培养基加10微升CCK8，悬浮培养时也采用该体系，若检测时取出一半检测，是否会影响实验结果或影响与他人结果的对比，能否将细胞悬液取出，离心后进行检测，但由于只有200微升，离心后取出的体积也会损失一些】
CCK-8比起MTT或者MTS最大的优势就是能够检测悬浮细胞，如果细胞在生长时没有出现团聚，那么孵育完之后可以直接上酶标仪检测
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6楼2013-09-11 08:17:20
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fanger

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想说悬浮细胞用药处理的，再要用CCK8检测增的话，不同浓度的药呀，应该要去掉含 药培养基吧？怎么做？平板离心机是多大转速离得下来呢。感觉3500也离不下来
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做好自己！
7楼2013-11-28 20:11:41
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changzichao

金虫 (正式写手)
同问，悬浮细胞做CCK8，细胞悬液要不要加血清啊，因为悬浮细胞不能换液，加血清后对OD值有没有影响？
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UCANUUP,NOCANNOBB
8楼2015-04-24 14:21:01
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