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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 悬浮细胞MTT法求助
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koalading

木虫 (小有名气)

[求助] 悬浮细胞MTT法求助 已有7人参与

我这个新手最近一直在做脾细胞MTT实验，发现实验重现性很不好，就找了一下原因
1、可能是接种密度的问题
2、后来保证了同时做两块板的细胞相同，可结果还是不好，又找原因可能是加完MTT后有些结晶就吸出来，可是这个度把握不好，不吸干净就会残留培养基影响吸光度。因为条件有限，没有平板离心机，除了吸出来还能怎么办呢？用注射器吸吗？
3、网上查了一下，有人说悬浮细胞可以使用三联溶解液，这样就不用吸出来了，可是我用的96孔板，每个孔已经有100微升悬液和100微升药物，孔的容积已经不够再加100溶解液了，这时候怎么办呢？（前提是药物体积如果加的太少，误差也很大，而且不均匀，所以我没有选择只加10微升，而是配成一定浓度后加100或50微升）
求各位大神帮忙解决一下我的困惑，多谢了
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1楼 2013-12-23 15:12:39
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急速Q7

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
本来MTT就不是太准确。我觉得原因很多：最可能的原因还是细胞密度不均匀；确定药品不会和MTT或DMSO有反应？；接种后多久测，中间细胞培养情况；吸的时候过狠，吸出晶体；等等都可能导致重复性差；要是冬天室内温度低，DMSO本身都会产生结晶；
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10楼2013-12-25 23:05:37
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么？？？
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I can and I will
3楼2013-12-24 10:45:41
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koalading

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by caiyifan at 2013-12-24 10:45:41
话说MTT不是要加DMSO溶解结晶后再测么？？？

是呀，不是先把上清液吸出来再加DMSO嘛，但是总能多少吸出部分结晶，肉眼可能看不到
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4楼2013-12-24 12:43:10
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caiyifan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

哦，这样啊，那你可以不做MTT，做MTS，就没那么麻烦了，不用加DMSO，也不用吸上清了。
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I can and I will
5楼2013-12-24 13:33:24
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