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koalading

木虫 (小有名气)

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[求助] 悬浮细胞MTT法求助已有7人参与

我这个新手最近一直在做脾细胞MTT实验，发现实验重现性很不好，就找了一下原因
1、可能是接种密度的问题
2、后来保证了同时做两块板的细胞相同，可结果还是不好，又找原因可能是加完MTT后有些结晶就吸出来，可是这个度把握不好，不吸干净就会残留培养基影响吸光度。因为条件有限，没有平板离心机，除了吸出来还能怎么办呢？用注射器吸吗？
3、网上查了一下，有人说悬浮细胞可以使用三联溶解液，这样就不用吸出来了，可是我用的96孔板，每个孔已经有100微升悬液和100微升药物，孔的容积已经不够再加100溶解液了，这时候怎么办呢？（前提是药物体积如果加的太少，误差也很大，而且不均匀，所以我没有选择只加10微升，而是配成一定浓度后加100或50微升）

求各位大神帮忙解决一下我的困惑，多谢了

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1楼 2013-12-23 15:12:39

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yinhl623

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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koalading: 金币+25, ★★★很有帮助, 不仅对实验有帮助，还从心态上帮助了我，十分感谢 2014-02-20 19:04:01

MTT实验本来准确度就不高，再说你用的是悬浮细胞，不离心的话很多紫色结晶物肯定会随着细胞被吸出来，孔间结果必然会很不均一。建议CCK8，没必要为老板节约这么点钱，老板的基金就是为了做实验用的，早点出成果比节约那点钱对老板更有利。假若老板见你长时间没做出好的结果，他不会考虑到是因为你节约钱才造成这种局面，只会觉得你能力不行，你自己也会越来越不自信，以后要买更贵的试剂就更不敢向老板提了，从此就陷入了越来越被动的怪圈。建议在老板有实验经费的情况下，尽量用好的试剂。至少，在实验结果与预期不符的时候，你可以首先排除试剂的原因，从而更容易找到解决的办法或者发现新的问题。