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maaotao铜虫 (初入文坛)
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细胞融合时候第一次克隆化生长的细胞为什么不能保证是单克隆化？
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| 如题，为什么为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成，第一次筛选后保证每个孔中只有一个细胞，这样再生长以后不就是单克隆细胞了吗？？ |
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2楼2012-05-14 14:51:49
wen1023tao
铜虫 (小有名气)
- BioEPI: 1
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- 专业: 植物遗传学
3楼2012-05-14 20:26:23
【答案】应助回帖
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融合后的细胞在孔里生长时，一般并不是一个单纯的克隆（一般是两个或者多个克隆，就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆，但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的），如果直接将其扩大培养将会产生两个问题：一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的，并且都分泌抗体，那么就有可能产生针对不同表位的抗体，这样最终得到的抗体不是单克隆抗体，而是“二克隆抗体”或“多个克隆产的抗体”；另一个问题是如果克隆中包括不能分泌抗体的杂交瘤，那么不能分泌抗体的杂交瘤因为增殖速度更快，最终将成为优势生长细胞，导致目标杂交瘤无法分离甚至完全消失。所以，细胞融合后，一旦鉴定可以产生目标抗体，就应立即进行克隆化，确保能分离出单个细胞重新形成克隆。 通常 融合孔的细胞虽然阳性，但由于刚融合后细胞容易缺失染色体，故分泌抗体不稳定，一般要经过2-3次亚克隆。通常，亚克隆为有限稀释，该方法需稀释到0.5个每孔时单克隆的孔数最多。这个是由泊松分布定律计算而来的，具体的上网查下原理吧。 |
4楼2012-05-15 11:10:59
5楼2015-04-10 12:55:08
