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质粒双酶切后回收效率非常低 已有6人参与
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400bp目的片段连接在Puc57上，载体大小4-5K，体系为50ul，SpeI和AscI各1ul双酶切，延长酶切时间，回收后浓度只有4ng/ul，同时对表达载体（约10K）酶切回收后的浓度为40ng/ul，目的片段这么低的浓度能够进行连接吗? 如果我把目的片段先扩出来，纯化后再双酶切，这样会不会好一点，只是有一点担心的是片段太小，会不会回收不到？有做过400bp片段PCR后双酶切的吗？ |
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