24小时热门版块排行榜    

查看: 1648  |  回复: 9

qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增后无条带,但能提出质粒 已有5人参与

做实验时PCR扩增后跑胶无条带,但是接着提质粒却能提出来。请问哪位碰到过相似的问题吗,求解答。
上面的图是质粒,下面的图是PCR扩增

PCR扩增后无条带,但能提出质粒
2015-3-19-01.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

屈从于现实的温暖
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看第二张图,跟没有模板似的,难道是模板被酶降解了?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-19 14:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-19 14:35:16
看第二张图,跟没有模板似的,难道是模板被酶降解了?

不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水,是早上刚挑的。
屈从于现实的温暖
3楼2015-03-19 14:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用载体通用引物PP看,不行就测序看看。后面三个不是P出来了吗?楼主的pcr阴性是哪个
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-03-19 16:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by qiaobethy at 2015-03-19 14:51:25
不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水,是早上刚挑的。...

没有,我是是被酶降解,使用高保真酶的话就有可能
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-03-19 16:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

素锦流年1991

新虫 (初入文坛)

PCR条件合适吗,建议查找PCR条件,可将你提到的质粒做模板进行PCR,看结果,第二个图是菌落PCR吗,如果是的话,做菌落PCR时是否将细菌裂解
6楼2015-03-19 18:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qiaobethy: 金币+5, 有帮助 2015-03-20 13:02:21
1.运用的菌株是哪一个,是否是适合菌体PCR
2. PCR条件是否合适,退火温度是不是较高
7楼2015-03-19 18:47:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhao0hong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
显然质粒是假的,没有模板序列,测个序就知道了。做pcr连阳性对照都没有!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2015-03-19 19:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能提出来的质粒是空载体。你肯定做完菌落PCR,然后挑菌提的质粒,那你最后不是该挑能扩出你目的基因的菌吗?那对应图里里挑的哪个菌?

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
9楼2015-03-19 19:36:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

谢谢各位,重新挑菌扩PCR,结果能出来。不知道为什么连续做不行,难道是量的问题。
屈从于现实的温暖
10楼2015-03-20 13:03:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiaobethy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见