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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增后无条带,但能提出质粒 已有5人参与

做实验时PCR扩增后跑胶无条带,但是接着提质粒却能提出来。请问哪位碰到过相似的问题吗,求解答。
上面的图是质粒,下面的图是PCR扩增

PCR扩增后无条带,但能提出质粒
2015-3-19-01.jpg
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屈从于现实的温暖
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看第二张图,跟没有模板似的,难道是模板被酶降解了?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-19 14:35:16
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-19 14:35:16
看第二张图,跟没有模板似的,难道是模板被酶降解了?

不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水,是早上刚挑的。
屈从于现实的温暖
3楼2015-03-19 14:51:25
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用载体通用引物PP看,不行就测序看看。后面三个不是P出来了吗?楼主的pcr阴性是哪个
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-03-19 16:09:17
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by qiaobethy at 2015-03-19 14:51:25
不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水,是早上刚挑的。...

没有,我是是被酶降解,使用高保真酶的话就有可能
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-03-19 16:59:32
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素锦流年1991

新虫 (初入文坛)

PCR条件合适吗,建议查找PCR条件,可将你提到的质粒做模板进行PCR,看结果,第二个图是菌落PCR吗,如果是的话,做菌落PCR时是否将细菌裂解
6楼2015-03-19 18:26:27
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qiaobethy: 金币+5, 有帮助 2015-03-20 13:02:21
1.运用的菌株是哪一个,是否是适合菌体PCR
2. PCR条件是否合适,退火温度是不是较高
7楼2015-03-19 18:47:41
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zhao0hong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
显然质粒是假的,没有模板序列,测个序就知道了。做pcr连阳性对照都没有!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2015-03-19 19:18:17
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能提出来的质粒是空载体。你肯定做完菌落PCR,然后挑菌提的质粒,那你最后不是该挑能扩出你目的基因的菌吗?那对应图里里挑的哪个菌?

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
9楼2015-03-19 19:36:49
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

谢谢各位,重新挑菌扩PCR,结果能出来。不知道为什么连续做不行,难道是量的问题。
屈从于现实的温暖
10楼2015-03-20 13:03:04
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