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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增后无条带，但能提出质粒
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增后无条带，但能提出质粒 已有5人参与

做实验时PCR扩增后跑胶无条带，但是接着提质粒却能提出来。请问哪位碰到过相似的问题吗，求解答。
上面的图是质粒，下面的图是PCR扩增

PCR扩增后无条带，但能提出质粒
2015-3-19-01.jpg
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屈从于现实的温暖
1楼 2015-03-19 13:11:41
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看第二张图，跟没有模板似的，难道是模板被酶降解了？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-19 14:35:16
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-19 14:35:16
看第二张图，跟没有模板似的，难道是模板被酶降解了？

不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水，是早上刚挑的。
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屈从于现实的温暖
3楼2015-03-19 14:51:25
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用载体通用引物PP看，不行就测序看看。后面三个不是P出来了吗？楼主的pcr阴性是哪个
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-19 16:09:17
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by qiaobethy at 2015-03-19 14:51:25
不会吧,我的模板是挑的菌混合的无菌水，是早上刚挑的。...

没有，我是是被酶降解，使用高保真酶的话就有可能
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-03-19 16:59:32
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素锦流年1991

新虫 (初入文坛)
PCR条件合适吗，建议查找PCR条件，可将你提到的质粒做模板进行PCR,看结果，第二个图是菌落PCR吗，如果是的话，做菌落PCR时是否将细菌裂解
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6楼2015-03-19 18:26:27
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiaobethy: 金币+5, ★有帮助 2015-03-20 13:02:21
1.运用的菌株是哪一个，是否是适合菌体PCR
2. PCR条件是否合适，退火温度是不是较高
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7楼2015-03-19 18:47:41
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zhao0hong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
显然质粒是假的，没有模板序列，测个序就知道了。做pcr连阳性对照都没有！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2015-03-19 19:18:17
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能提出来的质粒是空载体。你肯定做完菌落PCR，然后挑菌提的质粒，那你最后不是该挑能扩出你目的基因的菌吗？那对应图里里挑的哪个菌？

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
9楼2015-03-19 19:36:49
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)
谢谢各位，重新挑菌扩PCR，结果能出来。不知道为什么连续做不行，难道是量的问题。
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屈从于现实的温暖
10楼2015-03-20 13:03:04
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