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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


[交流] pcr 产物测序后双峰,我该怎么办?

pcr 产物测序后双峰,我该怎么办?
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ashlink

铁杆木虫 (文坛精英)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
帮顶
2楼2015-03-10 10:48:12
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18761615793

木虫 (正式写手)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
找原因
4楼2015-03-10 11:51:05
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
重测或者是换公司重测。
5楼2015-03-10 13:34:33
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林家女孩

金虫 (小有名气)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
换公司测下吧
6楼2015-03-10 15:20:52
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小威斯

铁虫 (小有名气)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
测序一般的开头和结尾很容易出现双峰,重测吧或者换公司
7楼2015-03-10 15:52:25
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wrongfeng

新虫 (小有名气)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
你的目的是什么呢?
1、如果PCR产物是特异性的单一条带,那可能是测序公司的问题,解决方法就是换加公司试试;
2、如果PCR产物非特异性的,可以用连接载体转化测序的方法。
8楼2015-03-10 16:10:11
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Forlornhope

新虫 (初入文坛)


★ ★
BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
BBMC-2012: 金币+1 2015-03-14 08:46:01
目测这种换公司也无济于事呀。把问题找到才是王道。我觉得可能有三种原因:一,pcr产物不纯,电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增,也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近,或浓度很低。解决办法是提高退火温度做pcr,或直接换pcr引物,再或者可以补订专门的测序引物做测序反应,提高测序反应特异性。二,pcr产物纯化做的有问题,可补做纯化看看。三,就是你送样的测序引物有污染,可补送引物测序。如果你做的是克隆测序,还有可能是纯在双克隆,楼主最好上图,这样会比较清楚

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2015-03-14 07:56:48
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cuiyuehi

新虫 (初入文坛)



BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
么有告诉你解决办法的测序公司不是好公司,哈哈

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2015-03-14 08:44:11
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
9楼: Originally posted by Forlornhope at 2015-03-14 07:56:48
目测这种换公司也无济于事呀。把问题找到才是王道。我觉得可能有三种原因:一,pcr产物不纯,电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增,也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近,或浓度很低。解决办法是提高 ...

谢谢啦,我直接测序pcr。准备克隆测序

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-03-14 08:45:49
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readytogo3楼
2015-03-10 10:53   回复  
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