[交流] pcr 产物测序后双峰，我该怎么办？

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1楼2015-03-10 10:43:03

ashlink

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帮顶

2楼2015-03-10 10:48:12

18761615793

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找原因

4楼2015-03-10 11:51:05

qiaobethy

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重测或者是换公司重测。

5楼2015-03-10 13:34:33

林家女孩

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换公司测下吧

6楼2015-03-10 15:20:52

小威斯

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测序一般的开头和结尾很容易出现双峰，重测吧或者换公司

7楼2015-03-10 15:52:25

wrongfeng

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你的目的是什么呢？
1、如果PCR产物是特异性的单一条带，那可能是测序公司的问题，解决方法就是换加公司试试；
2、如果PCR产物非特异性的，可以用连接载体转化测序的方法。

8楼2015-03-10 16:10:11

Forlornhope

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BBMC-2012: 金币+1 2015-03-14 08:46:01

目测这种换公司也无济于事呀。把问题找到才是王道。我觉得可能有三种原因：一，pcr产物不纯，电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增，也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近，或浓度很低。解决办法是提高退火温度做pcr,或直接换pcr引物，再或者可以补订专门的测序引物做测序反应，提高测序反应特异性。二，pcr产物纯化做的有问题，可补做纯化看看。三，就是你送样的测序引物有污染，可补送引物测序。如果你做的是克隆测序，还有可能是纯在双克隆，楼主最好上图，这样会比较清楚

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9楼2015-03-14 07:56:48

cuiyuehi

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么有告诉你解决办法的测序公司不是好公司，哈哈

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10楼2015-03-14 08:44:11

BBMC-2012

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引用回帖:

9楼: Originally posted by Forlornhope at 2015-03-14 07:56:48
目测这种换公司也无济于事呀。把问题找到才是王道。我觉得可能有三种原因：一，pcr产物不纯，电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增，也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近，或浓度很低。解决办法是提高 ...

谢谢啦，我直接测序pcr。准备克隆测序

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11楼2015-03-14 08:45:49