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BBMC-2012

木虫 (知名作家)

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[交流] pcr 产物测序后双峰，我该怎么办？

pcr 产物测序后双峰，我该怎么办？

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1楼2015-03-10 10:43:03

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Forlornhope

新虫 (初入文坛)

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★ ★
BBMC-2012(金币+1): 谢谢参与
BBMC-2012: 金币+1 2015-03-14 08:46:01

目测这种换公司也无济于事呀。把问题找到才是王道。我觉得可能有三种原因：一，pcr产物不纯，电泳条带单一并不一定就说明没有非特异性扩增，也可能非特异性扩增产物与目标产物size相近，或浓度很低。解决办法是提高退火温度做pcr,或直接换pcr引物，再或者可以补订专门的测序引物做测序反应，提高测序反应特异性。二，pcr产物纯化做的有问题，可补做纯化看看。三，就是你送样的测序引物有污染，可补送引物测序。如果你做的是克隆测序，还有可能是纯在双克隆，楼主最好上图，这样会比较清楚

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