24小时热门版块排行榜    

查看: 2924  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

utyutyy

新虫 (小有名气)


[求助] 为什么普通PCR后,电泳条带清晰,定量PCR却总是不出结果? 已有5人参与

最近在做miRNA的定量检测,用定量引物先做的普通PCR检测,以及退火温度摸条件,条带都很清晰。但是做了好几次qRT-PCR,Ct值都在40以上,内参U6的结果很正常。

难道同样的引物在普通PCR和qRT-PCR效果会不同么???
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


utyutyy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:43:43
荧光定量优化不能靠普通PCR来做
1 是确定你的模板没有问题
2 是多选几条引物看看
3 是荧光定量的程序优化一下
5楼2015-02-28 08:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
扩增片段多长?可以先做个半定量试试看。
2楼2015-01-19 12:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

utyutyy

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-19 12:53:49
扩增片段多长?可以先做个半定量试试看。

miRNA反转录出来一般都在80-100bp左右。师兄师姐以及同届其他人做这步试验时(也是miRNA),都能出结果。
而且我现在做的还是转染mimics后,验证转染后确实可以提高细胞内miRNA含量。转染我挺有信心的,之前做双荧光检测,都很顺利,而且这次我已经转染两次了。。。
3楼2015-01-19 13:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muyouleya

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


utyutyy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:43:24
1.普通PCR的条带确定不是引物二聚体?
2.做RT PCR的模板与普通PCR的模板是同一管的样本?
4楼2015-02-27 20:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见