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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量时ct值40以后还没起峰但有溶解曲线 是什么原因？
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lxl0708

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量时ct值40以后还没起峰但有溶解曲线 是什么原因？ 已有17人参与

荧光定量时目的基因ct值40以后还没起峰但有溶解曲线 是什么原因？怎么处理呀， 内参正常
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活出自己
1楼 2015-01-06 21:43:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoyugutou

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:44:56
Double check your target gene primer, if it is OK, maybe your target gene has a really low expression abundance.
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2楼2015-01-07 06:03:15
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xmcliulei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的基因没P出来呗~溶解曲线不但反应目的基因产物，同时也反应非特异性扩增产物。
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9楼2015-05-31 16:57:52
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拾玖

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先确定你的目的基因引物没问题   可以先用普通pcr试试  调调温度等条件
  若果引物没问题  你的内参CT在20左右  你的目的基因到40还没出峰  那就是你的目的基因表达量太低了  一般来说就不用做了  如果你的内参CT也比较大 在30左右  那就很有可能是你模板太低 可以把模板提高试试
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16楼2015-10-23 17:39:54
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-01-07 16:45:00
目的基因量太少，你确定溶解曲线的峰不是引物二聚体吗？
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3楼2015-01-07 08:53:33
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wxk19960113

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的基因浓度太低，提高浓度再试

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-01-15 00:08:48
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321原上草123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

目的基因本身含量低，而且底物（即cDNA加DEPC水太多了）浓度太低，下次可以把cDNA稀释倍数减小试试
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6楼2015-03-20 14:19:14
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缘分足矣

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很可能是引物二聚体，你可以跑下电泳，看看条带大小
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7楼2015-05-04 21:32:34
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普通回帖

sicilia189

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果引物设计没有问题的话，应该是目的基因表达量过低。
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4楼2015-01-15 00:03:59
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bryantchow

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-05-31 15:02:43
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sr4005

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

目标基因含量低，想办法扩大浓度再试吧！
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10楼2015-06-02 09:11:28
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