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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR起峰与平台期
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR起峰与平台期

请问为什么最近在做定量PCR时总之起峰很早（Ct值大约在20左右），但是平台期的荧光值却很低？而且平台期虽然珠峰存在，但是基线很乱，上下波动较大？
是不是说退火温度的影响呢？我们这边退火温度你一般使用的是60°，上下摆动控制在2°以内，参考的是primer5.0上给的参数。
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1楼 2013-07-15 00:17:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yangjianchen(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:46:24
最好把扩增曲线帖上来便于分析。此外，qPCR退火温度最好做温度梯度优化。
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2楼2013-07-15 01:31:46
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yangjianchen(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:46:35
退火温度是看具体的酶了，一般不知道的情况下做0.5的温度梯度调整正负3°就可以。
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3楼2013-07-15 07:32:22
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 07:32:22
退火温度是看具体的酶了，一般不知道的情况下做0.5的温度梯度调整正负3°就可以。

平台期低会不会是里面的dNTP等不充分
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4楼2013-07-15 19:40:52
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-07-15 19:40:52
平台期低会不会是里面的dNTP等不充分...

有可能……不过一般加底物都不会加少了吧。（我一般加多了。。）
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5楼2013-07-15 20:30:33
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yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 20:30:33
有可能……不过一般加底物都不会加少了吧。（我一般加多了。。）...

搞不清楚！哎。。。
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6楼2013-07-15 21:24:52
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