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木一木一

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】半定量PCR已有5人参与

求助各位:做半定量PCR,扩增actin基因跑电泳时,出现两条带,一条为所需的条带,在其下面还有一条带,是什么原因呢?
多谢多谢!
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zhaoxianfeng

金虫 (初入文坛)

★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41
是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因,出现两个条带,有的酶就只有一个条带,不过你剪下你需要的就可以了
2楼2010-11-22 09:13:34
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zhaoxianfeng

金虫 (初入文坛)


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lstt09nk:建议在原帖上编辑~~按帖子下方的编辑按钮即可~· 2010-11-22 17:58:46
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41

是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因,出现两个条带,有的酶就只有一个条带,不过你剪下你需要的就可以了
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2619291
不对,上面写错了,是加的引物的问题,错写成酶了,对不起了!
3楼2010-11-22 17:22:57
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littlehong

木虫 (初入文坛)

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scelab(金币+3):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-22 23:06:02
半定量PCR只需要看你的目标条带就好,下面的带有可能是杂带,也有可能是引物二聚体
如果引物足够好,可以直接用Real-time PCR检测就好
4楼2010-11-22 19:42:14
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

1、优化PCR条件,减少非特异扩增。
2、跑电泳之前,把PCR产物预热(80度)5分钟。
5楼2010-11-23 06:35:22
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木一木一

新虫 (初入文坛)

非常感谢各位的建议,这几天没上网也就没回帖,sorry呀,我是想做荧光定量的,但我师姐给我说如果跑的actin下面又杂带的话不能做,会出现好几个峰,而且我用的引物是小麦上边的,师姐们都做过了,跑actin的确是只在目的带处有一条,其他没有带的,好郁闷呀,总是做不好!
6楼2010-11-28 20:10:16
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kingallen

铜虫 (小有名气)

THANK YOU
一将功成万骨枯···
7楼2010-12-22 16:08:01
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