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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】半定量PCR
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木一木一

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】半定量PCR 已有5人参与

求助各位:做半定量PCR，扩增actin基因跑电泳时，出现两条带，一条为所需的条带，在其下面还有一条带，是什么原因呢？
多谢多谢！
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1楼 2010-11-22 08:55:07
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zhaoxianfeng

金虫 (初入文坛)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41
是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因，出现两个条带，有的酶就只有一个条带，不过你剪下你需要的就可以了
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2楼2010-11-22 09:13:34
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zhaoxianfeng

金虫 (初入文坛)
★
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lstt09nk:建议在原帖上编辑~~按帖子下方的编辑按钮即可~· 2010-11-22 17:58:46
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41

是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因，出现两个条带，有的酶就只有一个条带，不过你剪下你需要的就可以了
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2619291
不对，上面写错了，是加的引物的问题，错写成酶了，对不起了！
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3楼2010-11-22 17:22:57
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littlehong

木虫 (初入文坛)
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scelab(金币+3):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-22 23:06:02
半定量PCR只需要看你的目标条带就好，下面的带有可能是杂带，也有可能是引物二聚体
如果引物足够好，可以直接用Real-time PCR检测就好
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4楼2010-11-22 19:42:14
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
1、优化PCR条件，减少非特异扩增。
2、跑电泳之前，把PCR产物预热（80度）5分钟。
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5楼2010-11-23 06:35:22
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木一木一

新虫 (初入文坛)
非常感谢各位的建议，这几天没上网也就没回帖，sorry呀，我是想做荧光定量的，但我师姐给我说如果跑的actin下面又杂带的话不能做，会出现好几个峰，而且我用的引物是小麦上边的，师姐们都做过了，跑actin的确是只在目的带处有一条，其他没有带的，好郁闷呀，总是做不好！
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6楼2010-11-28 20:10:16
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kingallen

铜虫 (小有名气)
THANK YOU
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一将功成万骨枯···
7楼2010-12-22 16:08:01
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