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【求助/交流】半定量PCR
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木一木一
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[交流]
【求助/交流】半定量PCR
已有5人参与
求助各位:做半定量PCR,扩增actin基因跑电泳时,出现两条带,一条为所需的条带,在其下面还有一条带,是什么原因呢?
多谢多谢!
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1楼
2010-11-22 08:55:07
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zhaoxianfeng
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lstt09nk:建议在原帖上编辑~~按帖子下方的编辑按钮即可~· 2010-11-22 17:58:46
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41
是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因,出现两个条带,有的酶就只有一个条带,不过你剪下你需要的就可以了
本文来自: 小木虫论坛
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2619291
不对,上面写错了,是加的引物的问题,错写成酶了,对不起了!
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3楼
2010-11-22 17:22:57
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zhaoxianfeng
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专业: 营养与代谢生理学
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:44:41
是因为在反转CDNA的时候加的酶的原因,出现两个条带,有的酶就只有一个条带,不过你剪下你需要的就可以了
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2楼
2010-11-22 09:13:34
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littlehong
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专业: 生物化学
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scelab(金币+3):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-22 23:06:02
半定量PCR只需要看你的目标条带就好,下面的带有可能是杂带,也有可能是引物二聚体
如果引物足够好,可以直接用Real-time PCR检测就好
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4楼
2010-11-22 19:42:14
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exon2002
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虫号: 170490
注册: 2006-01-18
性别: GG
专业: 细胞信号转导
1、优化PCR条件,减少非特异扩增。
2、跑电泳之前,把PCR产物预热(80度)5分钟。
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5楼
2010-11-23 06:35:22
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