24小时热门版块排行榜    

查看: 3335  |  回复: 5

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR起峰与平台期

请问为什么最近在做定量PCR时总之起峰很早(Ct值大约在20左右),但是平台期的荧光值却很低?而且平台期虽然珠峰存在,但是基线很乱,上下波动较大?
是不是说退火温度的影响呢?我们这边退火温度你一般使用的是60°,上下摆动控制在2°以内,参考的是primer5.0上给的参数。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yangjianchen(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:46:24
最好把扩增曲线帖上来便于分析。此外,qPCR退火温度最好做温度梯度优化。
2楼2013-07-15 01:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yangjianchen(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:46:35
退火温度是看具体的酶了,一般不知道的情况下做0.5的温度梯度调整正负3°就可以。
3楼2013-07-15 07:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 07:32:22
退火温度是看具体的酶了,一般不知道的情况下做0.5的温度梯度调整正负3°就可以。

平台期低会不会是里面的dNTP等不充分
4楼2013-07-15 19:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-07-15 19:40:52
平台期低会不会是里面的dNTP等不充分...

有可能……不过一般加底物都不会加少了吧。(我一般加多了。。)
5楼2013-07-15 20:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 20:30:33
有可能……不过一般加底物都不会加少了吧。(我一般加多了。。)...

搞不清楚!哎。。。
6楼2013-07-15 21:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjianchen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
请填处理意见