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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 定量PCR双峰的处理方法

各位做定量PCR的同学，请看这个图，我的目标序列在左边的这个峰，后面这个峰应该会影响最后的荧光读数吧？应该怎么去避免？


[ Last edited by tingspdf on 2012-5-20 at 22:05 ]
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1楼 2012-05-20 21:53:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tingspdf: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-05-21 23:14:11
tingspdf: 金币+5 2012-05-23 22:52:15
你这个曲线挺标准的了，不会影响啥吧，因为定量PCR是看ct值的，也就是起峰是在第几圈的，不是看荧光强度大小的，所以我觉得没问题，不用担心
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2楼2012-05-21 14:18:40
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-21 14:18:40:
你这个曲线挺标准的了，不会影响啥吧，因为定量PCR是看ct值的，也就是起峰是在第几圈的，不是看荧光强度大小的，所以我觉得没问题，不用担心

您仔细看一下，右边最高的那个蓝色的峰对应的那条线，左边的峰跟它一样高，应该有影响吧？
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3楼2012-05-23 23:19:57
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by tingspdf at 2012-05-23 23:19:57:
您仔细看一下，右边最高的那个蓝色的峰对应的那条线，左边的峰跟它一样高，应该有影响吧？

我认为没影响，这里呈现的图是手动添加的溶解曲线图，并不是扩增曲线；
并且机器读取荧光值是在每圈循环延伸过程后读取，温度大约75-80度(？记不清，好久不做了)；你这个杂峰温度更高，应该不会有明显影响
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4楼2012-05-24 08:59:37
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-24 08:59:37:
我认为没影响，这里呈现的图是手动添加的溶解曲线图，并不是扩增曲线；
并且机器读取荧光值是在每圈循环延伸过程后读取，温度大约75-80度(？记不清，好久不做了)；你这个杂峰温度更高，应该不会有明显影响

我是72度读取的荧光值 那个峰在72度时无法解链，应该有影响吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2012-05-24 11:40:38
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
没问题的，标准的解离曲线就应该是80+度起峰的，这个图的纵坐标不是荧光强度，刚反应过来……
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6楼2012-05-24 19:44:33
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