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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 定量PCR双峰的处理方法

各位做定量PCR的同学,请看这个图,我的目标序列在左边的这个峰,后面这个峰应该会影响最后的荧光读数吧?应该怎么去避免?


[ Last edited by tingspdf on 2012-5-20 at 22:05 ]
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tingspdf: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢! 2012-05-21 23:14:11
tingspdf: 金币+5 2012-05-23 22:52:15
你这个曲线挺标准的了,不会影响啥吧,因为定量PCR是看ct值的,也就是起峰是在第几圈的,不是看荧光强度大小的,所以我觉得没问题,不用担心
2楼2012-05-21 14:18:40
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-21 14:18:40:
你这个曲线挺标准的了,不会影响啥吧,因为定量PCR是看ct值的,也就是起峰是在第几圈的,不是看荧光强度大小的,所以我觉得没问题,不用担心

您仔细看一下,右边最高的那个蓝色的峰对应的那条线,左边的峰跟它一样高,应该有影响吧?
3楼2012-05-23 23:19:57
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by tingspdf at 2012-05-23 23:19:57:
您仔细看一下,右边最高的那个蓝色的峰对应的那条线,左边的峰跟它一样高,应该有影响吧?

我认为没影响,这里呈现的图是手动添加的溶解曲线图,并不是扩增曲线;
并且机器读取荧光值是在每圈循环延伸过程后读取,温度大约75-80度(?记不清,好久不做了);你这个杂峰温度更高,应该不会有明显影响
4楼2012-05-24 08:59:37
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-24 08:59:37:
我认为没影响,这里呈现的图是手动添加的溶解曲线图,并不是扩增曲线;
并且机器读取荧光值是在每圈循环延伸过程后读取,温度大约75-80度(?记不清,好久不做了);你这个杂峰温度更高,应该不会有明显影响

我是72度读取的荧光值 那个峰在72度时无法解链,应该有影响吧?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2012-05-24 11:40:38
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

没问题的,标准的解离曲线就应该是80+度起峰的,这个图的纵坐标不是荧光强度,刚反应过来……
6楼2012-05-24 19:44:33
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