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目的片段换了酶切位点后连不上T载体了
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| 克隆的一个2000bp的片段,之前加的酶切位点是F:HIndIII,R:BamHI,连T载之后测序正确,因为这个片段还要连上其他载体,所以又换了另外两个酶切位点,F:ECoRI,R:SacI,然后就再也没连上了。。。用的高保真酶扩增,然后加A尾,转化的板子都长了的,可是菌液PCR没有目的片段,求教!!! |
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