24小时热门版块排行榜    

查看: 1546  |  回复: 16

childchou

银虫 (小有名气)


[交流] 目的片段换了酶切位点后连不上T载体了

克隆的一个2000bp的片段,之前加的酶切位点是F:HIndIII,R:BamHI,连T载之后测序正确,因为这个片段还要连上其他载体,所以又换了另外两个酶切位点,F:ECoRI,R:SacI,然后就再也没连上了。。。用的高保真酶扩增,然后加A尾,转化的板子都长了的,可是菌液PCR没有目的片段,求教!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:25
那就是假阳性了 重新制作引物试试

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-12-17 11:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

906868558

新虫 (初入文坛)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:32
现在不都用无缝克隆的方法了么,不受酶切位点的限制,阳性率能达到90%以上吧。
13楼2014-12-17 16:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gangouyang

金虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:38
加A加得不够吧,延长时间,再试试看。
14楼2014-12-17 18:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
加A用的TAQ酶?
那个的话72度30min加A。
15楼2014-12-18 14:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

childchou

银虫 (小有名气)


引用回帖:
15楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-12-18 14:50:57
加A用的TAQ酶?
那个的话72度30min加A。

对的啊,就是30min,哭了都
16楼2014-12-18 16:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by childchou at 2014-12-18 16:34:19
对的啊,就是30min,哭了都...

30min完了之后有没有10度或者4度10min
17楼2014-12-19 16:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dmbb2楼
2014-12-17 09:57   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
2014-12-17 09:58   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
ashlink4楼
2014-12-17 10:26   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
time885楼
2014-12-17 10:35   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
阿Q~~6楼
2014-12-17 10:39   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
neu2347楼
2014-12-17 10:47   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
2014-12-17 11:08   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
假大空9楼
2014-12-17 11:13   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
shenrenren10楼
2014-12-17 11:25   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
tzynew11楼
2014-12-17 11:42   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 childchou 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +3 y7czhao 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:23 by yeahyou
[考研] 284求调剂 +3 junqihahaha 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:07 by zyc晨晨晨
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见