应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的片段换了酶切位点后连不上T载体了
171/1返回列表
查看: 1626  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

childchou

银虫 (小有名气)

[交流] 目的片段换了酶切位点后连不上T载体了

克隆的一个2000bp的片段，之前加的酶切位点是F:HIndIII,R:BamHI,连T载之后测序正确，因为这个片段还要连上其他载体，所以又换了另外两个酶切位点，F:ECoRI,R:SacI,然后就再也没连上了。。。用的高保真酶扩增，然后加A尾，转化的板子都长了的，可是菌液PCR没有目的片段，求教！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-12-17 09:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:25
那就是假阳性了 重新制作引物试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
12楼2014-12-17 11:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

906868558

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:32
现在不都用无缝克隆的方法了么，不受酶切位点的限制，阳性率能达到90%以上吧。
赞一下 回复此楼
13楼2014-12-17 16:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gangouyang

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:50:38
加A加得不够吧，延长时间，再试试看。
赞一下 回复此楼
14楼2014-12-17 18:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加A用的TAQ酶？
那个的话72度30min加A。
赞一下 回复此楼
15楼2014-12-18 14:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

childchou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-12-18 14:50:57
加A用的TAQ酶？
那个的话72度30min加A。

对的啊，就是30min，哭了都
赞一下 回复此楼
16楼2014-12-18 16:34:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by childchou at 2014-12-18 16:34:19
对的啊，就是30min，哭了都...

30min完了之后有没有10度或者4度10min
赞一下 回复此楼
17楼2014-12-19 16:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dmbb2楼
2014-12-17 09:57   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
cxjzly20083楼
2014-12-17 09:58   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
ashlink4楼
2014-12-17 10:26   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
time885楼
2014-12-17 10:35   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
阿Q~~6楼
2014-12-17 10:39   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
neu2347楼
2014-12-17 10:47   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
kiss200855378楼
2014-12-17 11:08   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
假大空9楼
2014-12-17 11:13   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
shenrenren10楼
2014-12-17 11:25   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
tzynew11楼
2014-12-17 11:42   回复  
childchou(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 childchou 的主题更新
171/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭