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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我的pcr电泳结果怎么是这样，求大神指导
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laozake

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我的pcr电泳结果怎么是这样，求大神指导 已有9人参与

怎么改进啊？已经这样好久了，这还有点条带，很多时候都是整个泳道是亮的，以前可以P出来，效果很好，突然就这样了，求大神，前辈们指导啊！！！！！

我的pcr电泳结果怎么是这样，求大神指导
360截图.jpg
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1楼 2014-12-12 13:56:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:45:57
Marker一定要点，因为它可以用来排除是否是电泳，比如胶不均匀，电压，缓冲液等存在问题。以前可以P出来说明引物及反应程序也没问题，那你就要检测是不是模板，dntp,酶哪个出了问题。

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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
4楼2014-12-12 14:50:19
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普通回帖

意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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laozake: 金币+2 2014-12-12 15:06:43
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:45:46
首先，你先测下DNA质量，
其次，你点个marker看看胶是否有问题，
第三，调整DNA和引物的比例。

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2楼2014-12-12 14:17:54
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-12-12 14:17:54
首先，你先测下DNA质量，
其次，你点个marker看看胶是否有问题，
第三，调整DNA和引物的比例。

如果是引物特异性不好，可以做个slowdown或者touchdown试试！

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3楼2014-12-12 14:19:13
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laozake

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-12-12 14:17:54
首先，你先测下DNA质量，
其次，你点个marker看看胶是否有问题，
第三，调整DNA和引物的比例。

这些我都试过了，还是不行啊
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5楼2014-12-12 15:07:13
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laozake

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-12-12 14:19:13
如果是引物特异性不好，可以做个slowdown或者touchdown试试！
...

slowdown或者touchdown，不会啊，我是新来的，师兄也不会，我都尝试各种途径啦，基本还是如此，郁闷中。。。。。。。。。。
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6楼2014-12-12 15:08:30
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laozake

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 稻稻 at 2014-12-12 14:50:19
Marker一定要点，因为它可以用来排除是否是电泳，比如胶不均匀，电压，缓冲液等存在问题。以前可以P出来说明引物及反应程序也没问题，那你就要检测是不是模板，dntp,酶哪个出了问题。
...

marker跑出来是没有问题的，模板也是新的，我基本上把所有的东西都换成新的了，还是不行。
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7楼2014-12-12 15:09:43
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by laozake at 2014-12-12 15:08:30
slowdown或者touchdown，不会啊，我是新来的，师兄也不会，我都尝试各种途径啦，基本还是如此，郁闷中。。。。。。。。。。...

去网上找，到处都是

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8楼2014-12-12 15:38:27
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稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by laozake at 2014-12-12 15:09:43
marker跑出来是没有问题的，模板也是新的，我基本上把所有的东西都换成新的了，还是不行。...

你确定都换了新的也不行？引物也用重新稀释的了？一个个排除，或许你漏掉了，pcr水也没问题？

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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
9楼2014-12-12 16:52:40
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原子核LUKE

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by laozake at 2014-12-12 15:09:43
marker跑出来是没有问题的，模板也是新的，我基本上把所有的东西都换成新的了，还是不行。...

marker跑出来没问题，那就是pcr扩增的问题了。我觉得最有可能是引物或者退火温度的问题。

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10楼2014-12-13 08:58:04
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