应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5'RACE总是不出结果，求大神帮助
111/2返回列表12下一页
查看: 1547  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

修香恋

铜虫 (小有名气)

[求助] 5'RACE总是不出结果，求大神帮助 已有2人参与

本人一直在做5'RACE，但总是没有结果。PCR得到的结果经测序后多次为载体序列，也出现过扩出别的基因的情况，但条带大小看着和预期的差不多。求大神给予指点，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-09 21:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-08 12:18:29
你这个说的太笼统了啊…… RACE出不来有很多种可能的 模板RNA质量不好 cDNA反转录失败 引物特异性差 PCR体系不合适 退火温度和延伸时间不恰当 都是有可能的

另外按照我老师说的经验 RACE中出现一些非预计大小的片段很正常 这些片段很有可能是目的基因中的一段 或是其他基因 稍稍研究一下 说不清会有惊喜的
赞一下 回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
2楼2014-04-08 11:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 音四1990 at 2014-04-08 11:17:52
你这个说的太笼统了啊…… RACE出不来有很多种可能的 模板RNA质量不好 cDNA反转录失败 引物特异性差 PCR体系不合适 退火温度和延伸时间不恰当 都是有可能的

另外按照我老师说的经验 RACE中出现一些非预计大小的片 ...

谢谢啦!但是我测序之后发现只是通用引物在扩增，找不到自己的特异引物。而且我引物已经设了十条了，都没有结果。请问一下如何判断提取的RNA是否可以用于RACE？
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-09 11:10:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-30 13:58:03
RACE中得到假阳性结果是很正常的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-09 21:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-04-09 11:10:54
谢谢啦!但是我测序之后发现只是通用引物在扩增，找不到自己的特异引物。而且我引物已经设了十条了，都没有结果。请问一下如何判断提取的RNA是否可以用于RACE？...

RNA纯度2.0  浓度比较高 就是挺好的，其实你这个很可能是RNA在反转成cDNA的时候容易失败导致后续扩增没结果 可能你需要的目的基因上存在某种结构 导致产生错配啥的
赞一下 回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
5楼2014-04-10 21:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 音四1990 at 2014-04-10 21:47:09
RNA纯度2.0  浓度比较高 就是挺好的，其实你这个很可能是RNA在反转成cDNA的时候容易失败导致后续扩增没结果 可能你需要的目的基因上存在某种结构 导致产生错配啥的...

你用的哪种试剂盒？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-11 07:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-11 07:01:02
你用的哪种试剂盒？
...

诶？好眼熟……
国产的貌似 superswitch 在smart技术上改进的
赞一下 回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
7楼2014-04-11 16:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 音四1990 at 2014-04-11 16:34:59
诶？好眼熟……
国产的貌似 superswitch 在smart技术上改进的...

这种货色我也做得出来哦，不是原创的，所谓改进无非是抄抄得了，我就不用试剂盒，自己做，也挺好

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-11 20:08:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-11 20:08:02
这种货色我也做得出来哦，不是原创的，所谓改进无非是抄抄得了，我就不用试剂盒，自己做，也挺好
...

我很想自己做 试剂盒的引物快用完了 还有一个roche的太贵了不敢下手= =
5‘的Oligo（dG）和3’A尾其实都可以自己做的吧？我看很多大手都是自己合成引物和接头
赞一下 回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
9楼2014-04-12 09:54:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 音四1990 at 2014-04-12 09:54:23
我很想自己做 试剂盒的引物快用完了 还有一个roche的太贵了不敢下手= =
5‘的Oligo（dG）和3’A尾其实都可以自己做的吧？我看很多大手都是自己合成引物和接头...

自己做的话3k应该就差不多了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-04-12 12:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 修香恋 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-17 8/400 2026-03-21 02:12 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +11 chaojifeixia 2026-03-19 12/600 2026-03-21 01:49 by 星空星月
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 316求调剂 +5 梁茜雯 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:26 by 你好你好666
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭