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修香恋

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[求助] 5'RACE总是不出结果，求大神帮助已有2人参与

本人一直在做5'RACE，但总是没有结果。PCR得到的结果经测序后多次为载体序列，也出现过扩出别的基因的情况，但条带大小看着和预期的差不多。求大神给予指点，不胜感激！

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1楼 2014-03-09 21:54:42

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音四1990

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【答案】应助回帖

★
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-08 12:18:29

你这个说的太笼统了啊…… RACE出不来有很多种可能的模板RNA质量不好 cDNA反转录失败引物特异性差 PCR体系不合适退火温度和延伸时间不恰当都是有可能的

另外按照我老师说的经验 RACE中出现一些非预计大小的片段很正常这些片段很有可能是目的基因中的一段或是其他基因稍稍研究一下说不清会有惊喜的

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我没那种命啊轮也不会轮到我

2楼2014-04-08 11:17:52

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修香恋

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 音四1990 at 2014-04-08 11:17:52
你这个说的太笼统了啊…… RACE出不来有很多种可能的模板RNA质量不好 cDNA反转录失败引物特异性差 PCR体系不合适退火温度和延伸时间不恰当都是有可能的

另外按照我老师说的经验 RACE中出现一些非预计大小的片 ...

谢谢啦!但是我测序之后发现只是通用引物在扩增，找不到自己的特异引物。而且我引物已经设了十条了，都没有结果。请问一下如何判断提取的RNA是否可以用于RACE？

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3楼2014-04-09 11:10:54

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