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1029745237zz

新虫 (初入文坛)

[求助] 菜鸟求助,有关真核表达质粒构建的问题已有1人参与

虫友们,这两天有关质粒构建的问题一直困扰着我,希望知道的友友帮帮忙。我想知道构建真核表达质粒时,蛋白质的 CDS区得到的 cDNA,是不是不包括5”非编码区和3”非编码区,这样的质粒线性化插到动物基因组中,CDS 序列转录的RNA 是不是直接从起始密码子开始,不形成5”帽子结构,以至于翻译过程核糖体与 RNA 的结合能力有所下降,会在5”端任意序列结合。我这个思路对吗,哪里有问题,非常感谢。
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1029745237zz(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-08 20:01:29
5‘端的帽子结构,还3'端尾的结构还是会有的,不会出现内含子剪切。
转录起始位点跟启动子有关系,并不是从ATG开始的。表达载体多克隆位点后面有ployA加尾信号。
表达载体上的启动子都是强启动子,如pCMV。
为了增加翻译效率,ATG前面会加Kozark序列(GCCACC)。如果载体上面没有,你就设计引物的时候加上去。
2楼2014-11-08 17:39:29
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