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1029745237zz

新虫 (初入文坛)

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[求助] 菜鸟求助，有关真核表达质粒构建的问题已有1人参与

虫友们，这两天有关质粒构建的问题一直困扰着我，希望知道的友友帮帮忙。我想知道构建真核表达质粒时，蛋白质的 CDS区得到的 cDNA,是不是不包括5”非编码区和3”非编码区，这样的质粒线性化插到动物基因组中，CDS 序列转录的RNA 是不是直接从起始密码子开始，不形成5”帽子结构，以至于翻译过程核糖体与 RNA 的结合能力有所下降，会在5”端任意序列结合。我这个思路对吗，哪里有问题，非常感谢。

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1楼 2014-11-07 22:57:44

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BioChen

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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1029745237zz(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-08 20:01:29

5‘端的帽子结构，还3'端尾的结构还是会有的，不会出现内含子剪切。
转录起始位点跟启动子有关系，并不是从ATG开始的。表达载体多克隆位点后面有plｏｙＡ加尾信号。
表达载体上的启动子都是强启动子，如ｐＣＭＶ。
为了增加翻译效率，ＡＴＧ前面会加Ｋｏｚａｒｋ序列（ＧＣＣＡＣＣ）。如果载体上面没有，你就设计引物的时候加上去。

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