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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 真核表达载体构建
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sunnjjian

金虫 (小有名气)

[求助] 真核表达载体构建 已有5人参与

各位大神，小弟初次接触过表达载体构建，选择的载体是pCDNA3.1(+), 要做转染，别人说选择pcDNA3.1-EGFP（EGFP插入位点为EcoRI、NotI）好一些，但是我在最初设计酶切位点的时候引入的是EcoRI XHOI
是不是不能用啊？会把EGFP切掉，是不？
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1楼 2014-10-20 17:34:11
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-20 19:48:11
看你的载体说明书！看有没有你选择的酶切位点

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-10-20 17:35:47
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sunnjjian

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-10-20 17:35:47
看你的载体说明书！看有没有你选择的酶切位点

我的意思是：如果我选择pcDNA3.1-EGFP，引物中引入的酶切位点是不是会把EGFP给切掉
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3楼2014-10-20 17:37:30
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunnjjian at 2014-10-20 17:37:30
我的意思是：如果我选择pcDNA3.1-EGFP，引物中引入的酶切位点是不是会把EGFP给切掉...

看不懂你啥意思，帮不了你了

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-10-20 17:42:32
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunnjjian at 2014-10-20 17:37:30
我的意思是：如果我选择pcDNA3.1-EGFP，引物中引入的酶切位点是不是会把EGFP给切掉...

跟酶切位点的顺序有关。如果是XhoI-EcoRI-NotI或者NotI-EcoRI-XhoI可以，只是需要注意阅读框，别移码；如果是其他顺序就不行了。
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
5楼2014-10-20 19:04:34
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换引物吧，5毛钱一个碱基。
如果没有必要，就用pcDNA3.1。认真考虑下有没有加EGFP的必要性。
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6楼2014-10-20 22:35:50
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的哟，设计的时候没注意？不过可以交给生物公司做，你可以找一下Genloci公司，他们就是做这一块的
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7楼2014-10-21 08:57:50
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852634230

新虫 (初入文坛)
这个要看你们实验室加入eGFP的位置了（即加上EGFP的载体图），如果是XhoI-EcoRI-NotI或者NotI-EcoRI-XhoI会切掉的，其他的话没问题
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今日你对我爱答不理，明天让你高攀不起
8楼2014-10-21 11:56:17
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2534736991

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是初学者，你说的是对的，你可以换一下酶切位点，因为EGFP算是标记片段
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9楼2016-03-23 11:14:39
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