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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建过表达载体
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青痕

铁虫 (初入文坛)

[求助] 构建过表达载体 已有5人参与

我需要构建过表达载体，使用PBI121，必须使用Hind111酶切位点，但该酶在目的片段上有一个位点，怎么构建啊？
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1楼 2014-03-30 09:26:03
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:51
做个定点突变  把基因内部的位点消除掉
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2楼2014-03-30 09:54:54
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:44
可利用中间载体，进行转换片段。
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3楼2014-03-30 10:35:58
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:35
平联吧，切开，补平，PCR直接联
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有朋自网上来不亦乐乎
4楼2014-03-30 10:39:19
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青痕

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by neuralcrest at 2014-03-30 10:39:19
平联吧，切开，补平，PCR直接联

不太明白啊，大神，详细点吧！
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5楼2014-03-31 09:07:01
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cjzyfx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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青痕(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:06:39
一般遇见这种情况都会用gateway的方法构建，这种方法利用的是重组的原理
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迷茫的蚊子
6楼2014-03-31 13:33:35
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csup123

捐助贵宾 (正式写手)

懒虫

【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-31 15:23:30
3楼方法可行，4楼方法我揣测他的意思是把你其中一个重复的位点切开后用T4 polymerase补平，再直接平末端连接，那个酶切位点就不能用了
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哦
7楼2014-03-31 14:53:14
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 22:06:56
gyesang: 应助指数+1 2014-03-31 22:07:45
内容已删除
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有朋自网上来不亦乐乎
8楼2014-03-31 18:25:00
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
把你的目的片段用高保真酶克隆，纯化，用taq酶加a尾，连t载体，设计点突变引物，pcr将片段内酶切位点突变，用hindIII酶切，切胶回收突变后的（跑胶看长度）条带，连接目的载体。
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9楼2014-04-03 00:13:05
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scyjs

新虫 (初入文坛)
我想问一下，用PBI121构建表达载体，编码区怎么确定的啊
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10楼2014-08-28 10:46:10
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