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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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青痕

铁虫 (初入文坛)

[求助] 构建过表达载体 已有5人参与

我需要构建过表达载体,使用PBI121,必须使用Hind111酶切位点,但该酶在目的片段上有一个位点,怎么构建啊?
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

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青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:51
做个定点突变  把基因内部的位点消除掉
2楼2014-03-30 09:54:54
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:44
可利用中间载体,进行转换片段。
3楼2014-03-30 10:35:58
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
青痕(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-30 16:54:35
平联吧,切开,补平,PCR直接联
有朋自网上来不亦乐乎
4楼2014-03-30 10:39:19
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青痕

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by neuralcrest at 2014-03-30 10:39:19
平联吧,切开,补平,PCR直接联

不太明白啊,大神,详细点吧!
5楼2014-03-31 09:07:01
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cjzyfx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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青痕(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 22:06:39
一般遇见这种情况都会用gateway的方法构建,这种方法利用的是重组的原理
迷茫的蚊子
6楼2014-03-31 13:33:35
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csup123

捐助贵宾 (正式写手)

懒虫

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-31 15:23:30
3楼方法可行,4楼方法我揣测他的意思是把你其中一个重复的位点切开后用T4 polymerase补平,再直接平末端连接,那个酶切位点就不能用了
7楼2014-03-31 14:53:14
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neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 22:06:56
gyesang: 应助指数+1 2014-03-31 22:07:45
内容已删除
有朋自网上来不亦乐乎
8楼2014-03-31 18:25:00
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

把你的目的片段用高保真酶克隆,纯化,用taq酶加a尾,连t载体,设计点突变引物,pcr将片段内酶切位点突变,用hindIII酶切,切胶回收突变后的(跑胶看长度)条带,连接目的载体。
9楼2014-04-03 00:13:05
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scyjs

新虫 (初入文坛)

我想问一下,用PBI121构建表达载体,编码区怎么确定的啊
10楼2014-08-28 10:46:10
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