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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体构建时卡那浓度是多少？
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sjjsy7

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达载体构建时卡那浓度是多少？

最近在做原核表达，载体是PET-28a,可是老不成功，现在发现可能卡那浓度过高（我用的是100ug/ml，其实50ug/ml好一点），可是我不明白既然载体有抗性，那抗生素的浓度对菌株有什么影响？是不是过高就超过了耐受限度啊？希望大家解释一下，谢谢啦
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1楼 2012-10-05 10:53:42
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sjjsy7: 金币+1, ★有帮助 2012-10-05 22:52:58
抗生素的浓度太高，肯定是不行的啊，kan一般用的是50ug/ml
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
2楼2012-10-05 10:56:32
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sjjsy7: 金币+1 2012-10-05 22:53:05
楼主说的有道理，浓度高是有影响的，人必须吃盐，吃多了受不了的道理和这个一样的。我前段时间做原核表达，AMP的浓度用的是100ug/ml。
按步骤，注意温度、浓度以及添加体积。这个实验就很简单了。祝你好运。
赞一下 回复此楼
任重道远……
3楼2012-10-05 11:40:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗生素浓度过高增加代谢负荷。你还想让它大量表达次级产物，细菌也受不了的哇。
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4楼2012-10-05 15:59:04
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sjjsy7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by beishui at 2012-10-05 10:56:32
抗生素的浓度太高，肯定是不行的啊，kan一般用的是50ug/ml

好的！！
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5楼2012-10-05 22:51:55
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sjjsy7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by trizol11 at 2012-10-05 11:40:08
楼主说的有道理，浓度高是有影响的，人必须吃盐，吃多了受不了的道理和这个一样的。我前段时间做原核表达，AMP的浓度用的是100ug/ml。
按步骤，注意温度、浓度以及添加体积。这个实验就很简单了。祝你好运。

谢谢！！
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6楼2012-10-05 22:52:06
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sjjsy7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-05 15:59:04
抗生素浓度过高增加代谢负荷。你还想让它大量表达次级产物，细菌也受不了的哇。

哦，明白啦！！！
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7楼2012-10-05 22:52:37
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