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构重组质粒老是构不出来 请高手赐教 已有4人参与
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本人构重组质粒有一段时间了。有一个质粒一直构不出来。外源目的片段有500bp,从跑胶上看是我的目的片段。用的载体是pGL3-promoter ,酶切位点是 xho1和kpn1,从跑胶来看，比原始的质粒跑慢了很多，质粒是已经切开了的。 酶切反应： Buffer: 5ul PCR product/ pGL3-promoter 5000ng kpn1 5ul xho1 5ul 水补足到50ul。 酶切后的 pGL3-promoter进行sap处理 。跑胶回收后酶连过夜。酶连时，外源目的片段与载体的摩尔比是4：1。 用的酶都是泰克拉的。但是挑的单克隆都是空载体 做了不下五次 ，扩目的片段的引物也重新设计过一次。 |
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