应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 怎么老是连接失败？
151/2返回列表12下一页
查看: 1465  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wncgliu86

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么老是连接失败？ 已有7人参与

我用Eco EI和Not I双酶切约为460 bp的片段和pPICZA和pGAPZA，然后用T4连接酶，无论16度过夜还是常温1小时，都一直连接不上，切胶回收跑电泳有条带，是哪儿出问题了呢？谢谢大家
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-19 07:20:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 12:57:14
wncgliu86: 金币+1 2014-05-20 09:34:33
16度过夜？这么高，我一般是4度过夜，16度5小时
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-05-19 09:03:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 12:57:20
wncgliu86: 金币+1 2014-05-20 09:33:45
可以尝试改变一下连接体系中载体和目的基因的比例，此外，选用转化效率较高的感受态来进行转化
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-05-19 09:59:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-05-19 20:10:37
你用哪家的酶呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-19 10:02:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 12:57:33
wncgliu86: 金币+1 2014-05-20 09:33:59
作为新手，要多看技术文档。像连接失败，PCR不成功，酶切失败等问题，我没有办法给你具体的指导。
告诉你一个原则，“实验结果阴性，看阳性对照”。祝你实验成功。
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-19 11:20:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongge2013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 12:57:46
你460bp的片段是从哪切出来的？构建的克隆载体还是PCR产物
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-19 11:51:37
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wncgliu86: 金币+3 2014-05-20 09:34:20
你参考下：、
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5796216&fpage=1
赞一下 回复此楼
懒病又犯了……
7楼2014-05-19 14:49:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wncgliu86

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-19 10:02:32
你用哪家的酶呢？

NEB
8楼2014-05-20 09:32:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wncgliu86

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dongge2013 at 2014-05-19 11:51:37
你460bp的片段是从哪切出来的？构建的克隆载体还是PCR产物

PCR产物双酶切后回收
赞一下 回复此楼
9楼2014-05-20 09:33:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by wncgliu86 at 2014-05-20 09:33:23
PCR产物双酶切后回收...

你何不PCR产物ta下，测序对了再切

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-05-20 10:18:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wncgliu86 的主题更新
151/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 7/350 2026-03-02 08:29 by houyaoxu
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭