24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1496  |  回复: 14

wncgliu86

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-20 10:18:36
你何不PCR产物ta下,测序对了再切
...

你的意思是转T载体后再连接?
11楼2014-05-20 10:59:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by wncgliu86 at 2014-05-20 10:59:42
你的意思是转T载体后再连接?...

是滴,我一直这样弄的,比较踏实一点,尽管多花点时间

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-05-20 12:02:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
调整连接比例,或者换下回收方法
努力打败一切
13楼2014-05-20 23:31:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

你是两个PCR片段连接,还是两个PCR片段和载体分别连接,还是两个PCR片段连接,然后连接到载体里?

最简单的办法,就是每个PCR都连接到载体里,然后转化,测序,再做二次连接,这样成功率高,虽然费时,但是也就是一次连接和转化+筛选,也就是2-3天的时间而已。

连接我的做法一般都是:20ul体系里面1ul NEB T4 ligase,room temp 45 min, 然后转化,效率还不错,一般都可以有几十以上的菌落。

上面的朋友,4度连接是什么原理呢?16度是最适宜温度,好像不高吧?
14楼2014-05-21 06:11:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongge2013

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wncgliu86 at 2014-05-20 09:33:23
PCR产物双酶切后回收...

是在引物两端加的酶切位点?如果是,那你加保护碱基了吗?
15楼2014-05-21 16:24:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wncgliu86 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料340分调剂 +6 夏夜晚风_long 2026-04-02 8/400 2026-04-02 16:48 by yunlongyang
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-02 7/350 2026-04-02 16:22 by AZMK
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +16 bradoner 2026-04-01 20/1000 2026-04-02 15:27 by BruceLiu320
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 学硕化学工程与技术,一志愿中国海洋大学320+求调剂 +8 披星河 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:12 by oooqiao
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-27 7/350 2026-04-02 11:18 by sanrepian
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 09:15 by olim
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600,349 +9 吃的不少 2026-03-30 9/450 2026-04-01 11:24 by wangjy2002
[考研] 一志愿华南师范361分,化学求调剂 +4 Nicole88888 2026-04-01 4/200 2026-04-01 10:08 by 唐沐儿
[考研] 考研生物与医药调剂 +7 铁憨憨123425 2026-03-31 7/350 2026-04-01 08:45 by JourneyLucky
[考研] 309分085801求调剂 +7 学员Gtwj7W 2026-03-31 7/350 2026-04-01 02:36 by BruceLiu320
[考研] 调剂求院校招收 +7 鹤鲸鸽 2026-03-28 7/350 2026-03-31 11:21 by oooqiao
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
信息提示
请填处理意见