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白杨常成

新虫 (初入文坛)

[交流] 琼脂板上长不出菌落是什么原因 已有9人参与

请问培养的琼脂板上的菌落长不出来,有哪些原因呢,忘高手能够指点迷津。
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tianyinghu

金虫 (小有名气)


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1.抗性搞错了
2.抗性浓度不对
3.基因有毒
4.连接。转化出问题了
2楼2013-03-12 09:47:21
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liyu0355

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianyinghu at 2013-03-12 09:47:21
1.抗性搞错了
2.抗性浓度不对
3.基因有毒
4.连接。转化出问题了

仔细检查一下,实验程序有没有出错的地方。

最好再做一次。
3楼2013-03-12 11:01:33
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
还有一点就是你做连接前的质粒和片段的浓度问题,如果浓度过于低,有可能就连不上,就会不长。主要应该就是出在载体和片段的问题上了,重点关注一下浓度还有载体的信息吧。祝你成功
为了梦想不断坚持在路上
4楼2013-03-12 11:22:46
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suijinkai

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by 白杨常成 at 2013-03-12 11:24:10
嗯,非常感谢各位师兄师姐的回复,抗性应该没错,按照质粒要求,我用的AMP,2yt培养基加浓度100mg/ml的amp100微升,连接转化不知道有没有问题,只能在试一下了,再弱弱的问一下,是不是必须有质粒转化到大肠杆菌后, ...

那肯定是的,一般的感受态大肠杆菌是没有抗性的,当然不能在有抗生素的培养基上生长;但是板子放的时间长了,抗生素失效,菌可能会长起来。
机会只给有准备的人!
6楼2013-03-12 11:37:17
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oylb

禁言 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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7楼2013-03-12 11:42:52
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
就像楼上分析的那样,当你做不成功时,所有的问题都暴漏出来了,建议把你的问题及操作过程再详述一下,连接转化时时间一定要充裕,转化时的温度及时间要把握好!
9楼2013-03-14 09:07:13
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白杨常成

新虫 (初入文坛)

非常感谢各位师兄师姐的及时回复,恩,我是从纸片上提的质粒,纸片是国外运过来的的,剪了三分之一,第一次浓度测试是66纳克每微升,感受态买的天根的,吸了10微升做转化,热激60秒,冰浴2分钟,加入SOC培养基一毫升,摇菌一小时,然后涂LB培养板,过夜。大概步骤是这样,是不是浓度太低了,或者质粒被降解了呢。
10楼2013-03-24 23:22:36
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普通回帖

白杨常成

新虫 (初入文坛)

嗯,非常感谢各位师兄师姐的回复,抗性应该没错,按照质粒要求,我用的AMP,2yt培养基加浓度100mg/ml的amp100微升,连接转化不知道有没有问题,只能在试一下了,再弱弱的问一下,是不是必须有质粒转化到大肠杆菌后,细菌才能在琼脂培养板上长出来呢,如果没有质粒转进去,或者只有大肠杆菌能在板上生长吗?
5楼2013-03-12 11:24:10
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啊Q精神

木虫 (小有名气)


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如果感受态制备有问题也不会长
8楼2013-03-14 08:54:04
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