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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂板上长不出菌落是什么原因
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白杨常成

新虫 (初入文坛)

[交流] 琼脂板上长不出菌落是什么原因 已有9人参与

请问培养的琼脂板上的菌落长不出来，有哪些原因呢，忘高手能够指点迷津。
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1楼 2013-03-12 09:00:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tianyinghu

金虫 (小有名气)
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1.抗性搞错了
2.抗性浓度不对
3.基因有毒
4.连接。转化出问题了
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2楼2013-03-12 09:47:21
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liyu0355

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by tianyinghu at 2013-03-12 09:47:21
1.抗性搞错了
2.抗性浓度不对
3.基因有毒
4.连接。转化出问题了

仔细检查一下，实验程序有没有出错的地方。

最好再做一次。
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3楼2013-03-12 11:01:33
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)
★
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还有一点就是你做连接前的质粒和片段的浓度问题，如果浓度过于低，有可能就连不上，就会不长。主要应该就是出在载体和片段的问题上了，重点关注一下浓度还有载体的信息吧。祝你成功
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为了梦想不断坚持在路上
4楼2013-03-12 11:22:46
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suijinkai

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 白杨常成 at 2013-03-12 11:24:10
嗯，非常感谢各位师兄师姐的回复，抗性应该没错，按照质粒要求，我用的AMP,2yt培养基加浓度100mg/ml的amp100微升，连接转化不知道有没有问题，只能在试一下了，再弱弱的问一下，是不是必须有质粒转化到大肠杆菌后， ...

那肯定是的，一般的感受态大肠杆菌是没有抗性的，当然不能在有抗生素的培养基上生长；但是板子放的时间长了，抗生素失效，菌可能会长起来。
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机会只给有准备的人！
6楼2013-03-12 11:37:17
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oylb

禁言 (正式写手)
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本帖内容被屏蔽
7楼2013-03-12 11:42:52
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mangmanglulu

金虫 (小有名气)
★
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就像楼上分析的那样，当你做不成功时，所有的问题都暴漏出来了，建议把你的问题及操作过程再详述一下，连接转化时时间一定要充裕，转化时的温度及时间要把握好！
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9楼2013-03-14 09:07:13
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白杨常成

新虫 (初入文坛)
非常感谢各位师兄师姐的及时回复，恩，我是从纸片上提的质粒，纸片是国外运过来的的，剪了三分之一，第一次浓度测试是66纳克每微升，感受态买的天根的，吸了10微升做转化，热激60秒，冰浴2分钟，加入SOC培养基一毫升，摇菌一小时，然后涂LB培养板，过夜。大概步骤是这样，是不是浓度太低了，或者质粒被降解了呢。
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10楼2013-03-24 23:22:36
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普通回帖

白杨常成

新虫 (初入文坛)
嗯，非常感谢各位师兄师姐的回复，抗性应该没错，按照质粒要求，我用的AMP,2yt培养基加浓度100mg/ml的amp100微升，连接转化不知道有没有问题，只能在试一下了，再弱弱的问一下，是不是必须有质粒转化到大肠杆菌后，细菌才能在琼脂培养板上长出来呢，如果没有质粒转进去，或者只有大肠杆菌能在板上生长吗？
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5楼2013-03-12 11:24:10
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啊Q精神

木虫 (小有名气)
★
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如果感受态制备有问题也不会长
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8楼2013-03-14 08:54:04
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