| 查看: 1434 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
构重组质粒老是构不出来 请高手赐教 已有4人参与
|
||
|
本人构重组质粒有一段时间了。有一个质粒一直构不出来。外源目的片段有500bp,从跑胶上看是我的目的片段。用的载体是pGL3-promoter ,酶切位点是 xho1和kpn1,从跑胶来看，比原始的质粒跑慢了很多，质粒是已经切开了的。 酶切反应： Buffer: 5ul PCR product/ pGL3-promoter 5000ng kpn1 5ul xho1 5ul 水补足到50ul。 酶切后的 pGL3-promoter进行sap处理 。跑胶回收后酶连过夜。酶连时，外源目的片段与载体的摩尔比是4：1。 用的酶都是泰克拉的。但是挑的单克隆都是空载体 做了不下五次 ，扩目的片段的引物也重新设计过一次。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有156人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组质粒不表达
已经有9人回复
- 怎么老是连接失败？
已经有14人回复
- 重组质粒构建 连接转化效率低 求帮助啊
已经有19人回复
- 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
已经有13人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？
已经有5人回复
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- PET-32A重组质粒构建
已经有20人回复
- PGEX-6P-1 载体构建 求帮忙
已经有10人回复
- 质粒大提的疑问！！高手进来解答一下~
已经有5人回复
- Red重组老是不成功，求救
已经有49人回复
- 如何构建质粒以及提取它
已经有4人回复
- 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？
已经有13人回复
- 连接转化假阳性提不出来质粒吗？
已经有8人回复
- pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
已经有7人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
已经有16人回复
- 用于表达的重组载体构建后需要测序吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】怎样区分空载和重组质粒？
已经有9人回复
4楼2014-10-29 19:54:36
zhaodahe
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 220 (大学生)
- 金币: 1796.6
- 红花: 7
- 帖子: 461
- 在线: 378.5小时
- 虫号: 552612
- 注册: 2008-04-30
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
2楼2014-10-26 16:05:49
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2014-10-26 16:31:57
5楼2014-10-29 19:55:52
120