24小时热门版块排行榜    

查看: 2202  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

露的想念

新虫 (小有名气)

[求助] 最近在做原核表达纯化,但是蛋白一直都没有诱导出来。好捉急啊! 已有2人参与

最近在构建表达人的6KD左右的蛋白,从生物公司合成的基因,以及是公司构建的表达载体(pET-30a),用的是His标签,拿回来换了许多诱导条件,在相应的位置上也没有条带,有人建议说把目的基因切下来重新连到pET-30a上,大家觉得有这种必要吗?有没有人遇到这种情况啊?急急急
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackie.z

新虫 (初入文坛)

如果换了多次诱导条件的话且测序无误,建议WB验证下是否表达
9楼2014-10-27 23:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.表达载体是否已经过测序验证,如果没有,一定要做。
2.如果测序没有问题,那可能就是诱导条件的问题,一通常做法是改变诱导物IPTG浓度、降低表达温度。
2楼2014-10-23 18:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露的想念

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-10-23 18:22:35
1.表达载体是否已经过测序验证,如果没有,一定要做。
2.如果测序没有问题,那可能就是诱导条件的问题,一通常做法是改变诱导物IPTG浓度、降低表达温度。

没有测序了,从公司拿回来就看了一下公司给的序列,没问题,试了好多诱导条件,还是不行啊
3楼2014-10-23 18:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scqing

捐助贵宾 (小有名气)


是不是表达出来,但没挂上镍柱?
4楼2014-10-24 14:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 19/950 2026-08-12 10:55 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +5 Tide man 2026-08-11 5/250 2026-08-12 09:24 by kangban
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
请填处理意见