24小时热门版块排行榜    

查看: 1919  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

露的想念

新虫 (小有名气)

[求助] 最近在做原核表达纯化,但是蛋白一直都没有诱导出来。好捉急啊! 已有2人参与

最近在构建表达人的6KD左右的蛋白,从生物公司合成的基因,以及是公司构建的表达载体(pET-30a),用的是His标签,拿回来换了许多诱导条件,在相应的位置上也没有条带,有人建议说把目的基因切下来重新连到pET-30a上,大家觉得有这种必要吗?有没有人遇到这种情况啊?急急急
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackie.z

新虫 (初入文坛)

如果换了多次诱导条件的话且测序无误,建议WB验证下是否表达
9楼2014-10-27 23:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.表达载体是否已经过测序验证,如果没有,一定要做。
2.如果测序没有问题,那可能就是诱导条件的问题,一通常做法是改变诱导物IPTG浓度、降低表达温度。
2楼2014-10-23 18:22:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露的想念

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-10-23 18:22:35
1.表达载体是否已经过测序验证,如果没有,一定要做。
2.如果测序没有问题,那可能就是诱导条件的问题,一通常做法是改变诱导物IPTG浓度、降低表达温度。

没有测序了,从公司拿回来就看了一下公司给的序列,没问题,试了好多诱导条件,还是不行啊
3楼2014-10-23 18:44:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scqing

捐助贵宾 (小有名气)


是不是表达出来,但没挂上镍柱?
4楼2014-10-24 14:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子!
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
请填处理意见